GDP-甘露糖(táng)醛(quán)酸的製備(bèi)方法(fǎ)有哪些
2025-09-18
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一,生(shēng)物合(hé)成法(fǎ)
生物合(hé)成法依托酶催(cuī)化(huà)反(fǎn)應,利用廉價(jià)原料(liào)高(gāo)效合(hé)成目(mù)標(biāo)產物,具體(tǐ)可(kě)分為(wéi)體外酶促(cù)合成和微(wēi)生(shēng)物發酵合成兩(liǎng)類。
體外(wài)酶促(cù)合(hé)成(chéng)
原料:以甘露糖(táng)(Man)和鳥(niǎo)苷三(sān)磷(lín)酸(GTP)為起始(shǐ)原(yuán)料。
優(yōu)化措(cuò)施(shī):體係中(zhōng)常加入(rù)焦磷(lín)酸酶分解(jiě)PPi,避免(miǎn)其(qí)對(duì)可逆(nì)反應的(dí)抑(yì)製(zhì),提高產率。
純(chún)化(huà):反(fǎn)應結(jié)束後,通(tōng)過離子(zǐ)交(jiāo)換(huàn)層析(xī),高(gāo)效液相色譜(HPLC)等(děng)手段純化(huà)產(chǎn)物,最(zuì)終(zhōng)獲得高純(chún)度(dù)的(dí)GDP-甘露糖(táng)醛(quán)酸(suān),純(chún)度可(kě)達(dá)95%以(yǐ)上(shàng)。
步驟:
甘(gān)露糖在己糖(táng)激(jī)酶(méi)作用下(xià)與ATP反(fǎn)應(yīng),生成(chéng)甘露(lòu)糖-6-磷酸(Man-6-P),此過程需(xū)鎂離子激活激(jī)酶(méi)活性(xìng),反應條件多為30-37℃,中(zhōng)性pH(7.0-7.5)的緩衝體係(xì)。
Man-6-P經磷(lín)酸甘(gān)露(lòu)糖(táng)異(yì)構酶轉化為甘露糖-1-磷酸(suān)(Man-1-P),隨後(hòu)在(zài)GDP-甘露(lòu)糖焦磷酸化酶(méi)催化下(xià),Man-1-P與(yǔ)GTP反(fǎn)應,轉移焦磷(lín)酸基(jī)團生成GDP-甘(gān)露(lòu)糖醛酸和(hé)焦(jiāo)磷酸(suān)(PPi)。
微生物(wù)發(fā)酵合成
原理:利(lì)用基因(yīn)工(gōng)程(chéng)改(gǎi)造(zào)的微(wēi)生(shēng)物(wù),通過(guò)導(dǎo)入(rù)編(biān)碼相(xiāng)關酶(如己(jǐ)糖激酶,焦磷(lín)酸化酶)的基(jī)因,使(shǐ)其(qí)在細胞內自主合(hé)成(chéng)GDP-甘(gān)露糖(táng)醛(quán)酸。
二,化學(xué)合成法(fǎ)
原理:通(tōng)過(guò)多步(bù)有(yǒu)機反(fǎn)應構(gòu)建(jiàn)GDP-甘(gān)露(lòu)糖醛酸(suān)的化(huà)學結構(gòu),包括糖環的合成(chéng),磷(lín)酸基團(tuán)的引入以(yǐ)及(jí)鳥苷(gān)部分(fēn)的(dí)連接等。
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溫(wēn)馨(xīn)提示:僅用(yòng)於(yú)科研,不(bù)能用於人(rén)體(tǐ)!
相(xiāng)關(guān)產(chǎn)品:
1811-31-0 N-Acetylgalactosamine (GalNAc)
UDP-2-alkynyl-GlcNAc
UDP-2-carbonyl-GlcNAc
UDP-6-Biotinyl-GlcNAc
UDP-2-Biotinyl-GlcNAc
UDP-6-N3-GalNAc
UDP-2-alkynyl-GalNAc
UDP-6-Biotinyl-GalNAc
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