以下(xià)是牛(niú)血清(qīng)蛋白偶聯黃(huáng)體酮(tóng)的幾(jī)種常(cháng)見(jiàn)製(zhì)備(bèi)方法：

活(huó)潑(pō)酯(zhǐ)法(fǎ)

• 原理：先將(jiāng)黃(huáng)體(tǐ)酮進行化學修(xiū)飾(shì)，引入羧基(jī)等(děng)活(huó)性基團(tuán)，然後(hòu)與(yǔ)牛(niú)血清(qīng)蛋白上(shàng)的氨基通(tōng)過(guò)活(huó)潑(pō)酯反應形成(chéng)酰胺鍵(jiàn)，實(shí)現偶聯。

• 步驟(zhòu)：將(jiāng)黃體(tǐ)酮(tóng)半(bàn)抗(kàng)原溶解(jiě)於N,N-二(èr)甲(jiǎ)基(jī)甲酰(xiān)胺（DMF）中，再(zài)分別將(jiāng)N-羥(qiǎng)基(jī)琥珀酰(xiān)亞胺(àn)（NHS），1-乙基-(3-二(èr)甲基氨基丙基(jī))碳(tàn)酰(xiān)二(èr)亞胺鹽酸鹽(yán)（EDC）溶(róng)解於(yú)DMF，使三者的摩爾比(bǐ)為1:2:2。室(shì)溫下，磁力(lì)攪拌器攪拌(bàn)12～16小(xiǎo)時，轉(zhuǎn)速(sù)為250～300rpm，使(shǐ)半抗(kàng)原(yuán)上的(dí)羧基充分(fēn)活(huó)化。冰浴下(xià)，緩慢攪(jiǎo)拌，逐漸滴(dī)加活化的半(bàn)抗原到5～7mg/mL的牛血清白蛋白（BSA）中(zhōng)，使(shǐ)DMF在(zài)溶液的最(zuì)終濃度為20～25％。低溫下(xià)緩(huǎn)慢(màn)攪拌偶(ǒu)聯12～16小時(shí)，將(jiāng)半抗原和載(zǎi)體(tǐ)蛋白的偶(ǒu)聯物裝(zhuāng)入(rù)透析(xī)袋中，4℃下(xià)透析三天，一天(tiān)換(huàn)3次(cì)PBS（0.01M；pH 7.4）除(chú)去多餘的DMF。最(zuì)後，10,000～12,000rpm，4℃下(xià)離心10min，棄(qì)沉澱，取(qǔ)上清，使用BCA蛋白(bái)定量試(shì)劑(jì)盒測(cè)量濃度(dù)，分裝於EP管(guǎn)中(zhōng)，儲存(cún)於(yú)-20℃備用。

碳二(èr)亞胺(àn)法(fǎ)

• 原理：碳(tàn)二(èr)亞胺類化合(hé)物(wù)作為脫水(shuǐ)劑，促進羧基(jī)和氨(ān)基(jī)之間形成酰胺(àn)鍵。可替寧分子(zǐ)中(zhōng)存在羧(suō)基(jī)等活性基團(tuán)，牛血(xiě)清蛋白上有(yǒu)豐富的氨(ān)基，利(lì)用(yòng)碳二(èr)亞(yà)胺使(shǐ)兩(liǎng)者發(fā)生(shēng)縮(suō)合(hé)反應，從而(ér)實現(xiàn)偶聯。

• 步(bù)驟(zhòu)：首先將可替寧和(hé)牛血(xiě)清(qīng)蛋白分別溶(róng)解(jiě)在(zài)合(hé)適的緩衝液(yè)中，然(rán)後將碳二亞胺試劑(jì)（如EDC，即1-乙(yǐ)基-(3-二甲(jiǎ)基(jī)氨基丙基)碳二(èr)亞胺鹽(yán)酸鹽(yán)）加(jiā)入到可(kě)替寧溶液(yè)中，活化(huà)一段時間後，將活化(huà)後(hòu)的可(kě)替寧(níng)溶(róng)液緩(huǎn)慢(màn)滴加(jiā)到牛(niú)血清蛋白(bái)溶液中，在一定(dìng)的溫度和pH條件下攪拌(bàn)反(fǎn)應數(shù)小時(shí)。反(fǎn)應(yīng)結(jié)束後(hòu)，通過(guò)透(tòu)析(xī)或凝(níng)膠(jiāo)過濾等方法去(qù)除未反應的物(wù)質(zhì)和雜(zá)質，得到可(kě)替(tì)寧-牛(niú)血清蛋白共軛(è)物(wù)。

戊(wù)二醛(quán)法

• 原(yuán)理：戊二醛是一種雙(shuāng)功能交(jiāo)聯劑，能夠(gòu)與蛋(dàn)白(bái)質分子(zǐ)中的氨基發(fā)生反應，形成席(xí)夫(fū)鹼結構(gòu)，從而將(jiāng)兩(liǎng)個蛋(dàn)白質(zhì)分子連接起來。

• 步驟(zhòu)：把(bǎ)牛血(xiě)清蛋(dàn)白溶(róng)解在(zài)緩(huǎn)衝(chōng)液中(zhōng)，加(jiā)入適量的(dí)戊二(èr)醛(quán)溶(róng)液(yè)，在(zài)一定溫度下攪拌(bàn)反(fǎn)應一(yī)段時間(jiān)，使牛血(xiě)清蛋白分子之間發生輕(qīng)度交聯，這(zhè)樣可(kě)以增(zēng)加(jiā)蛋白的(dí)反(fǎn)應活性(xìng)位點。然後(hòu)將可替寧加入(rù)到上述(shù)反應體係中(zhōng)，繼續(xù)在適(shì)宜的(dí)條件下(xià)反(fǎn)應數小時。反(fǎn)應(yīng)完成後，同樣需(xū)要進(jìn)行(háng)純化(huà)處理(lǐ)，以獲得純(chún)淨(jìng)的(dí)共(gòng)軛(è)物。

關(guān)於(yú)我(wǒ)們:

陝西星貝愛(ài)科生(shēng)物(wù)科技經營的(dí)產品種類包(bāo)括有：合(hé)成磷脂，高分子聚(jù)乙二醇(chún)衍生(shēng)物，嵌段共(gòng)聚物，磁性(xìng)納(nà)米顆(kē)粒，納米金(jīn)及(jí)納米金(jīn)棒，近(jìn)紅(hóng)外熒(yíng)光染料，活性(xìng)熒(yíng)光(guāng)染(rǎn)料，熒光標(biāo)記物，蛋(dàn)白交(jiāo)聯(lián)劑，小分子(zǐ)PEG衍(yǎn)生物，點擊(jī)化學產品，樹枝(zhī)狀聚合物，環糊(hū)精(jīng)衍(yǎn)生(shēng)物，大環(huán)配體類(lèi)，熒(yíng)光量子(zǐ)點(diǎn)，透(tòu)明質酸衍生(shēng)物，石墨(mò)烯(xī)或氧(yǎng)化(huà)石墨(mò)烯(xī)，碳(tàn)納米(mǐ)管，富勒烯，二(èr)氧(yǎng)化矽(guī)及介孔二氧化矽，聚合(hé)物微球(qiú)，近紅(hóng)外熒光(guāng)染料，聚苯(běn)乙烯微(wēi)球(qiú)，上(shàng)轉換(huàn)納米發光(guāng)顆粒，MRI核磁(cí)造影產(chǎn)品(pǐn)，熒光(guāng)蛋(dàn)白及熒光(guāng)探針等等。

溫馨(xīn)提示：供應(yīng)產品僅用於(yú)科(kē)研(yán)，不能用(yòng)於人體！

相關產品：

生(shēng)物素(sù)-亞麻木(mù)酚(fēn)素

生(shēng)物(wù)素(sù)標記(jì)胰島素 Biotin-Insulin

生物(wù)素-昆(kūn)布多(duō)糖(táng)，Biotin-Glucan

草酰乙酸(suān)-生物(wù)素(sù)Oxobutanedioic acid-BIOTIN 

OVA-BIOTIN，卵清(qīng)蛋白修飾生物(wù)素(sù)

Posaconazole-NHS，泊沙(shā)康(kāng)唑-活化酯(zhǐ)

大黃(huáng)素-生物素，Emodin-BIOTIN

生(shēng)物素標(biāo)記岩(yán)藻(zǎo)多糖，Biotin-Fucoidan

Protein A-BIOTIN，蛋白A修(xiū)飾生(shēng)物(wù)素

纖維二(èr)糖(táng)-生(shēng)物素，D-(+)-Cellobiose-biotin

維(wéi)生素(sù)A酸-生物素(sù)，Retinoic acid-BIOTIN