氨(ān)丙(bǐng)啉(lán)-雞(jī)卵清白(bái)蛋白(bái)偶(ǒu)聯物(wù)的製(zhì)備方法主要有以(yǐ)下(xià)幾種(zhǒng)：

戊(wù)二(èr)醛二(èr)步法(fǎ)

• 原理：戊二醛(quán)為一(yī)種(zhǒng)雙功能(néng)試劑，通(tōng)過(guò)其(qí)醛基分別與酶(méi)和免疫球蛋(dàn)白上的氨(ān)基共價(jià)結(jié)合(hé)，形(xíng)成酶-戊(wù)二(èr)醛(quán)-抗(kàng)體結合物(wù)。

• 步驟：

• 取一(yī)定量(liáng)的過(guò)氧(yǎng)化物酶（如辣根過(guò)氧(yǎng)化物酶，HRP），用0.1M的PBS（pH6.8）溶(róng)解(jiě)，配(pèi)製(zhì)成一(yī)定(dìng)濃度的酶(méi)溶液(yè)。

• 向酶(méi)溶(róng)液中(zhōng)加入(rù)適量的戊二(èr)醛，使其終濃(nóng)度(dù)為0.05% - 0.1%，室溫下(xià)攪拌(bàn)反(fǎn)應(yīng)1 - 2小(xiǎo)時。

• 反應(yīng)結(jié)束(shù)後，用(yòng)PBS透析(xī)或超(chāo)濾(lǜ)除去未(wèi)反(fǎn)應的(dí)戊二醛。

• 取一(yī)定量的(dí)氨丙啉，用(yòng)0.1M的(dí)PBS（pH7.2）溶(róng)解，配製成(chéng)一定濃度(dù)的氨丙(bǐng)啉溶(róng)液。

• 將上述(shù)處(chǔ)理後(hòu)的酶溶(róng)液與(yǔ)氨丙啉溶(róng)液(yè)混(hùn)合，室溫下攪拌反(fǎn)應(yīng)2 - 4小(xiǎo)時(shí)。

• 反應結(jié)束後，用PBS透析(xī)或超(chāo)濾除去未反應的氨丙啉，得(dé)到氨丙(bǐng)啉(lán)-過(guò)氧(yǎng)化物酶(méi)標(biāo)記(jì)物。

過碘(diǎn)酸鈉(nà)法(fǎ)

• 原(yuán)理(lǐ)：過碘(diǎn)酸鈉(nà)可將HRP分子(zǐ)表麵的糖鏈(liàn)氧化，形(xíng)成醛基(jī)，再(zài)與氨(ān)丙啉(lán)上(shàng)的氨(ān)基結(jié)合(hé)，形成標(biāo)記物(wù)。

• 步驟：

• 取一定(dìng)量的HRP，用(yòng)0.1M的(dí)PBS（pH6.8）溶(róng)解，配製成(chéng)一定濃(nóng)度(dù)的酶溶(róng)液。

• 向(xiàng)酶溶液中(zhōng)加(jiā)入(rù)適量的(dí)過碘酸鈉，使其(qí)終濃度(dù)為0.05% - 0.1%，室(shì)溫下(xià)攪拌反(fǎn)應30 - 60分(fēn)鐘。

• 反應(yīng)結束後，用PBS透(tòu)析或(huò)超(chāo)濾除去(qù)未(wèi)反應的(dí)過碘(diǎn)酸鈉(nà)。

• 取一定量(liáng)的(dí)氨(ān)丙啉，用0.1M的(dí)PBS（pH7.2）溶解，配製(zhì)成(chéng)一定濃度(dù)的氨丙啉溶液(yè)。

• 將上述處(chǔ)理後(hòu)的(dí)酶(méi)溶液與(yǔ)氨丙啉(lán)溶(róng)液混合，室(shì)溫下攪拌(bàn)反應2 - 4小(xiǎo)時(shí)。

• 反應(yīng)結(jié)束(shù)後，用(yòng)PBS透(tòu)析或(huò)超濾(lǜ)除去未反應(yīng)的氨(ān)丙啉，得到氨丙啉-過氧(yǎng)化(huà)物酶(méi)標記物(wù)。

碳(tàn)二(èr)亞胺法(fǎ)

• 原理(lǐ)：碳二亞(yà)胺可活(huó)化HRP分子上的羧基，使(shǐ)其與(yǔ)氨丙啉上的氨基(jī)形成酰(xiān)胺鍵，從而實(shí)現標記。

• 步驟：

• 取一定量(liáng)的HRP，用0.1M的PBS（pH6.8）溶(róng)解，配製成一定濃(nóng)度的酶溶(róng)液(yè)。

• 向(xiàng)酶(méi)溶液(yè)中加(jiā)入適量(liáng)的碳二亞胺（如(rú)EDC），使(shǐ)其終濃度為(wéi)0.05% - 0.1%，室(shì)溫下(xià)攪拌(bàn)反(fǎn)應1 - 2小時。

• 反(fǎn)應(yīng)結(jié)束後，用(yòng)PBS透析(xī)或(huò)超濾除(chú)去未(wèi)反應(yīng)的碳(tàn)二(èr)亞(yà)胺。

• 取(qǔ)一定量(liáng)的(dí)氨丙啉(lán)，用0.1M的(dí)PBS（pH7.2）溶解，配製成(chéng)一定濃(nóng)度(dù)的(dí)氨丙(bǐng)啉(lán)溶液。

• 將上述處(chǔ)理後的酶(méi)溶液(yè)與(yǔ)氨丙(bǐng)啉溶液混合，室溫(wēn)下(xià)攪拌(bàn)反(fǎn)應2 - 4小時。

• 反應結(jié)束後，用(yòng)PBS透(tòu)析或超(chāo)濾(lǜ)除(chú)去未(wèi)反(fǎn)應(yīng)的(dí)氨(ān)丙啉，得(dé)到氨(ān)丙(bǐng)啉-過氧(yǎng)化物酶(méi)標(biāo)記(jì)物。

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