膽鈣化(huà)醇-過(guò)氧(yǎng)化(huà)物酶標(biāo)記物的(dí)製(zhì)備方法主要(yào)有以(yǐ)下(xià)幾(jī)種：

過(guò)碘酸(suān)鹽氧化(huà)法(fǎ)

• 原理：過碘(diǎn)酸鈉將(jiāng)辣(là)根(gēn)過(guò)氧(yǎng)化(huà)物酶(méi)（HRP）分(fēn)子表(biǎo)麵的(dí)多(duō)糖(táng)氧化為醛基，醛基與膽(dǎn)鈣化醇分子上的(dí)氨(ān)基形(xíng)成Schiff鹼(jiǎn)而結(jié)合，後(hòu)者可(kě)進(jìn)一步(bù)用NaBH₄（或(huò)乙(yǐ)醇胺(àn)）還原生成穩定(dìng)的(dí)酶標記(jì)物(wù)。

• 操作步驟：

• 將HRP溶(róng)解在適量的(dí)緩衝(chōng)溶(róng)液(yè)中，加入過(guò)碘酸(suān)鈉溶(róng)液(yè)，在一定溫(wēn)度下(xià)避(bì)光(guāng)反應(yīng)一段時(shí)間，使HRP表麵的(dí)多糖(táng)被(bèi)氧(yǎng)化為(wéi)醛(quán)基(jī)。

• 將膽(dǎn)鈣化醇溶解在合適的(dí)有機溶劑中，加入(rù)到上述(shù)氧化後(hòu)的HRP溶(róng)液中(zhōng)，在鹼性(xìng)條(tiáo)件(jiàn)下反應(yīng)，使醛(quán)基(jī)與(yǔ)膽鈣化(huà)醇的氨(ān)基形(xíng)成Schiff鹼。

• 加(jiā)入NaBH₄溶(róng)液，在一(yī)定(dìng)溫度下(xià)反(fǎn)應(yīng)一段(duàn)時間，將Schiff鹼(jiǎn)還原為穩定(dìng)的共(gòng)價鍵，得(dé)到膽(dǎn)鈣化醇-過(guò)氧(yǎng)化(huà)物酶標記物。

• 對(duì)反(fǎn)應(yīng)產物(wù)進(jìn)行透析或超(chāo)濾(lǜ)等(děng)純化操(cāo)作(zuò)，去除未反應的(dí)小(xiǎo)分子物質，得(dé)到(dào)純化的標(biāo)記物(wù)。

戊(wù)二(èr)醛(quán)交(jiāo)聯(lián)法(fǎ)

• 原(yuán)理(lǐ)：戊二醛作(zuò)為(wéi)雙功能交(jiāo)聯劑(jì)，可(kě)與HRP和膽(dǎn)鈣化醇分子上的氨(ān)基反(fǎn)應，形成穩定(dìng)的交(jiāo)聯產物。

• 操作步(bù)驟：

• 將HRP和膽鈣化醇(chún)分(fēn)別溶解在(zài)適當(dāng)的緩(huǎn)衝溶液(yè)中(zhōng)。

• 向HRP溶(róng)液(yè)中(zhōng)加入(rù)適(shì)量的戊(wù)二醛溶液，在一定溫(wēn)度(dù)下(xià)反應一段時間(jiān)，使(shǐ)HRP分(fēn)子上(shàng)的(dí)氨基與戊(wù)二(èr)醛的醛基(jī)反應。

• 將上(shàng)述反應液(yè)與(yǔ)膽鈣化醇溶液混合，在(zài)一(yī)定(dìng)溫(wēn)度下(xià)繼續(xù)反(fǎn)應(yīng)，使戊二醛的另(lìng)一個醛(quán)基與膽(dǎn)鈣(gài)化(huà)醇分(fēn)子上(shàng)的(dí)氨基反應，形成交聯產物(wù)。

• 對(duì)反(fǎn)應產(chǎn)物進行透析或(huò)超濾(lǜ)等純(chún)化操作(zuò)，去除未反(fǎn)應的戊(wù)二(èr)醛(quán)和其他小分子(zǐ)物質，得到(dào)純(chún)化的膽鈣化醇-過氧(yǎng)化物(wù)酶標記(jì)物。

其他方(fāng)法

• 直(zhí)接(jiē)偶聯法：利(lì)用(yòng)某些化(huà)學試劑(jì)或(huò)酶(méi)促反應，將膽鈣化醇直接與(yǔ)HRP進(jìn)行(háng)偶聯(lián)。例如，使(shǐ)用N-羥基(jī)琥(hǔ)珀(pò)酰(xiān)亞胺酯(zhǐ)（NHS）等活化試劑，將膽(dǎn)鈣(gài)化醇(chún)活化後(hòu)與HRP分子上(shàng)的氨基反應，形成穩(wěn)定(dìng)的(dí)偶聯(lián)物。

• 間(jiān)接(jiē)偶(ǒu)聯法(fǎ)：通過(guò)引入(rù)中間(jiān)連接分(fēn)子(zǐ)，如生物素-親和素(sù)係統，將(jiāng)膽(dǎn)鈣(gài)化(huà)醇與(yǔ)HRP間接(jiē)偶(ǒu)聯。首先(xiān)將膽鈣(gài)化醇與生物素結(jié)合，然後(hòu)利用親和素與(yǔ)生物素的(dí)特異性(xìng)結(jié)合，將(jiāng)親(qīn)和素標記的HRP與生物素化的膽鈣化(huà)醇結(jié)合，形成標(biāo)記(jì)物。

關(guān)於(yú)我(wǒ)們(mén):

陝西星貝(bèi)愛科(kē)生物科(kē)技經(jīng)營的產(chǎn)品種類包括有(yǒu)：合(hé)成(chéng)磷脂，高(gāo)分(fēn)子(zǐ)聚乙二醇衍(yǎn)生(shēng)物，嵌段(duàn)共聚物(wù)，磁(cí)性納(nà)米顆粒(lì)，納米金(jīn)及(jí)納米金(jīn)棒(bàng)，近紅外熒(yíng)光(guāng)染料，活性熒(yíng)光(guāng)染料，熒光標記物(wù)，蛋白交聯(lián)劑(jì)，小(xiǎo)分子PEG衍生物，點擊化學(xué)產品，樹(shù)枝狀聚合物(wù)，環(huán)糊(hū)精(jīng)衍生(shēng)物，大環(huán)配體(tǐ)類(lèi)，熒光量子點，透明(míng)質(zhì)酸衍生(shēng)物(wù)，石(shí)墨烯(xī)或氧(yǎng)化(huà)石墨烯(xī)，碳納米管(guǎn)，富(fù)勒(lè)烯，二(èr)氧化矽及介孔(kǒng)二氧(yǎng)化(huà)矽(guī)，聚合(hé)物(wù)微球(qiú)，近(jìn)紅外熒(yíng)光染(rǎn)料(liào)，聚苯(běn)乙(yǐ)烯微球(qiú)，上(shàng)轉(zhuǎn)換納米發(fā)光顆粒(lì)，MRI核(hé)磁造影產品，熒(yíng)光蛋白(bái)及熒光(guāng)探針等(děng)等(děng)。

溫(wēn)馨提示(shì)：供(gōng)應產(chǎn)品僅用於科研(yán)，不(bù)能用(yòng)於人體(tǐ)！

相關(guān)產品(pǐn)：

FA-HSA-Cy5.5，葉(yè)酸(suān)-人(rén)血清白(bái)蛋白(bái)Cy5.5標記(jì)物，Folic Acid-HSA-Cy5.5 Conjugate

FA-BSA-Cy5.5，葉(yè)酸-牛(niú)血清(qīng)白(bái)蛋(dàn)白Cy5.5標記(jì)物(wù)，Folic Acid-BSA-Cy5.5 Conjugate

FA-Cy5.5，葉酸花(huā)青染料(liào)5.5標記(jì)物(wù)，Folic Acid-Cyanine 5.5 Conjugate

FA-Cy5，葉酸花青染料5標(biāo)記(jì)物，Folic Acid-Cyanine 5 Conjugate

半(bàn)乳糖化(huà)人(rén)血(xiě)清(qīng)白(bái)蛋(dàn)白，Galactose-HSA Conjugate

半(bàn)乳糖化聚賴氨酸，Galactose-Poly-lysine conjugate，G-PLL

雌三醇(chún)-過氧(yǎng)化(huà)物(wù)酶標(biāo)記物Estriol-HRP Conjugate，E3-HRP

雌(cí)三(sān)醇-雞(jī)卵清白(bái)蛋白偶(ǒu)聯(lián)物(wù)Estriol-OVA Conjugate，E3-OVA

雌(cí)三(sān)醇-牛(niú)血清白(bái)蛋白偶(ǒu)聯物(wù)Estriol-BSA Conjugate，E3-BSA

新黴素-過氧化物酶標記物Neomycin-HRP Conjugate

新黴素(sù)-雞(jī)卵(luǎn)清白(bái)蛋白(bái)偶(ǒu)聯物Neomycin-OVA Conjugate