一，結構特(tè)點(diǎn)——三(sān)段(duàn)式(shì)精密設計(jì)

Biotin-LC-Hydrazide由(yóu)三個(gè)功(gōng)能(néng)模塊(kuài)組(zǔ)成(chéng)
，每(měi)個(gè)模塊(kuài)各(gè)司其(qí)職
，協(xié)同(tóng)發揮最大效(xiào)用。

1. 生物素(sù)端（Biotin）

生物(wù)素(sù)即維(wéi)生素(sù)B7/維生(shēng)素(sù)H
，含有噻(sāi)唑環(huán)和咪唑環組(zǔ)成(chéng)的雙(shuāng)環(huán)結構。它(tā)能(néng)與(yǔ)鏈黴親和素（Streptavidin）或親(qīn)和素(sù)（Avidin）形成已知較(jiào)強的(dí)非(fēi)共價(jià)分子間(jiān)相互作用(yòng)
，解離(lí)常數Kd低至約10⁻¹⁵ mol/L
，相(xiāng)當於(yú)"分子(zǐ)強(qiáng)力(lì)膠(jiāo)"
，用於靶向捕獲，信號放大與高靈(líng)敏度檢(jiǎn)測(cè)。

2. LC長鏈(liàn)間(jiān)隔臂（Long Chain Spacer）

LC即Long Chain
，由6-氨基己(jǐ)酸構成的6碳(tàn)烴(tīng)鏈(liàn)
，長度約24.7 Å（約(yuē)1.9 nm）。相比普通Biotin-Hydrazide的(dí)短(duǎn)鏈(liàn)間(jiān)隔臂（僅(jǐn)15.7 Å）
，LC鏈(liàn)多出約(yuē)9 Å的(dí)空間緩衝(chōng)距(jù)離(lí)。這(zhè)一設(shè)計(jì)的(dí)核心意義在於：當生(shēng)物素(sù)與(yǔ)鏈黴(méi)親和(hé)素結合時(shí)
，LC鏈能有(yǒu)效減少空(kōng)間位阻(zǔ)
，保(bǎo)護被標記(jì)生(shēng)物分子(zǐ)的(dí)天(tiān)然(rán)構象與生物活性不(bù)受(shòu)幹擾(rǎo)。

3. 酰(xiān)肼端（-CONHNH₂）

酰(xiān)肼基團是整個分子的(dí)"反應(yīng)活性端"
，可與醛基（-CHO）或酮基(jī)（C=O）在弱(ruò)酸(suān)性至中(zhōng)性條(tiáo)件(jiàn)下(xià)發(fā)生(shēng)特異(yì)性(xìng)反應。該(gāi)反應(yīng)條件(jiàn)溫(wēn)和，選擇性高
，是標記氧(yǎng)化(huà)糖基(jī)的理(lǐ)想化(huà)學工具(jù)。

二(èr)，化學反應特點(diǎn)

反應(yīng)條(tiáo)件(jiàn)溫(wēn)和(hé)

酰肼(jǐng)與醛(quán)基/酮(tóng)基(jī)的反(fǎn)應在pH 4~7範圍(wéi)內即可高(gāo)效進行(háng)
，無需(xū)金屬(shǔ)催化劑
，反(fǎn)應副產(chǎn)物(wù)僅(jǐn)為(wéi)水
，對生物分(fēn)子(zǐ)極為(wéi)友好(hǎo)。

特(tè)異性(xìng)較(jiào)強(qiáng)

酰肼基團(tuán)隻與醛基和酮基(jī)反應
，不與氨(ān)基(jī)，羧(suō)基，羥基等(děng)常(cháng)見(jiàn)官能(néng)團發生(shēng)交叉反應
，確(què)保標記(jì)的(dí)位點專(zhuān)一(yī)性。

腙(zōng)鍵(jiàn)穩(wěn)定(dìng)性(xìng)可控

形(xíng)成的(dí)腙(zōng)鍵在中(zhōng)性(xìng)至弱酸性條(tiáo)件(jiàn)（pH 5~7）下(xià)非(fēi)常(cháng)穩定(dìng)
，適(shì)合長期儲(chǔ)存和實驗(yàn)操(cāo)作。但在(zài)強酸性條(tiáo)件（pH<3）下(xià)可(kě)水解(jiě)斷(duàn)裂
，便於後續(xù)釋放(fàng)被(bèi)標記(jì)分(fēn)子
，實現(xiàn)"可(kě)逆(nì)標(biāo)記"策略。

雙模式偶(ǒu)聯能力

第一(yī)種模(mó)式(shì)（主(zhǔ)要）：酰(xiān)肼(jǐng)的(dí)-NHNH₂與(yǔ)醛基(jī)/酮(tóng)基反(fǎn)應形成腙鍵(jiàn)
，這(zhè)是較(jiào)經典(diǎn)的(dí)標記(jì)方式(shì)。第(dì)二種模式（次要）：在(zài)EDC/NHS等(děng)交聯劑存在下
，酰(xiān)肼末端的-NH₂也可(kě)與蛋白質羧基(jī)反(fǎn)應(yīng)形成酰胺鍵
，適(shì)用(yòng)於同時含醛(quán)基和羧(suō)基(jī)的(dí)復雜體(tǐ)係。

氧(yǎng)化(huà)標記(jì)策略(lüè)

糖蛋(dàn)白經高碘酸(suān)鈉(nà)（NaIO₄
，1~10 mM）氧化後(hòu)
，糖鏈上的鄰(lín)二(èr)醇結構(gòu)被切開
，產生醛基
，隨(suí)後與(yǔ)酰肼(jǐng)反應形成腙(zōng)鍵。由於(yú)多數(shù)抗體(tǐ)的(dí)糖基(jī)化位(wèi)點(diǎn)位於Fc段(duàn)（遠(yuǎn)離抗(kàng)原(yuán)結合(hé)區(qū)）
，因(yīn)此用Biotin-LC-Hydrazide標(biāo)記不會(huì)影響抗(kàng)體(tǐ)的(dí)免疫(yì)結(jié)合功能
，這是其(qí)較(jiào)經(jīng)典的應用(yòng)場(cháng)景。

三(sān)，應(yīng)用(yòng)特點

糖蛋白(bái)標記（最(zuì)核(hé)心(xīn)用(yòng)途）

經NaIO₄氧(yǎng)化糖(táng)蛋白(bái)後(hòu)
，酰肼(jǐng)與(yǔ)新生(shēng)成的醛基反應
，實現糖鏈(liàn)的(dí)特異(yì)性生(shēng)物(wù)素化。由(yóu)於(yú)糖基化(huà)位點(diǎn)通(tōng)常(cháng)遠離蛋(dàn)白質功(gōng)能域
，標(biāo)記(jì)後蛋(dàn)白質的(dí)生(shēng)物活(huó)性得(dé)以(yǐ)完(wán)整保留。廣(guǎng)泛(fàn)用於(yú)ELISA，Western Blot，免疫(yì)沉(chén)澱，流式細(xì)胞術(shù)等免(miǎn)疫(yì)分析實(shí)驗(yàn)。

蛋(dàn)白質羰(tāng)基化檢測(cè)

氧(yǎng)化(huà)應激可(kě)導致蛋白質(zhì)側鏈產(chǎn)生(shēng)羰(tāng)基(jī)（C=O）
，酰肼基團能特異(yì)性與蛋白質羰(tāng)基反應(yīng)
，用(yòng)於(yú)定量檢(jiǎn)測蛋白質(zhì)氧(yǎng)化損(sǔn)傷程(chéng)度
，是(shì)研(yán)究(jiū)衰老(lǎo)，神經退(tuì)行性(xìng)疾(jí)病，心血管疾(jí)病等的(dí)重要(yào)工具(jù)。

碳(tàn)水化合物(wù)與多(duō)糖(táng)標(biāo)記

可(kě)直接標記含醛基(jī)的(dí)多糖(táng)，寡糖(táng)
，或經氧(yǎng)化產生(shēng)醛(quán)基(jī)的多(duō)糖(táng)
，用(yòng)於(yú)糖生物學(xué)和糖(táng)組學研究。

信號放(fàng)大與高靈敏度(dù)檢(jiǎn)測

結(jié)合生(shēng)物素-鏈黴(méi)親和素(sù)係統(tǒng)
，一個鏈(liàn)黴親和素(sù)可結(jié)合(hé)4個生(shēng)物(wù)素(sù)
，每(měi)個生物素(sù)又(yòu)可連(lián)接一個HRP或熒光(guāng)分(fēn)子
，實現(xiàn)多級信號放大(dà)
，檢(jiǎn)測靈(líng)敏度(dù)可達pg/mL級別(bié)。

納(nà)米(mǐ)材料(liào)功能化(huà)

修飾(shì)金納(nà)米粒(lì)，磁性(xìng)納米粒，量(liáng)子點等(děng)納米(mǐ)材料(liào)表(biǎo)麵
，LC鏈(liàn)提(tí)供的(dí)空間緩(huǎn)衝(chōng)能(néng)減(jiǎn)少納米粒子聚(jù)集(jí)
，提(tí)升水(shuǐ)溶性和(hé)生(shēng)物相容(róng)性
，降(jiàng)低免疫(yì)原性(xìng)。

分(fēn)子(zǐ)橋梁角色

Biotin-LC-Hydrazide可(kě)作(zuò)為"橋梁(liáng)分(fēn)子(zǐ)"：一(yī)端(duān)通(tōng)過(guò)生物(wù)素實現捕獲與富集
，另(lìng)一端通(tōng)過酰(xiān)肼實現共價(jià)標記
，滿(mǎn)足"捕獲-檢(jiǎn)測(cè)-修飾(shì)"一體化需(xū)求。

四，理化(huà)性質(zhì)特(tè)點

分子(zǐ)量(liáng)：約371.50 g/mol（C₁₆H₂₉N₅O₃S）

CAS號：109276-34-8

外觀：白(bái)色至淺(qiǎn)黃(huáng)色粉(fěn)末(mò)

純(chún)度(dù)：≥95%

溶解性：易溶於DMSO，DMF，甲醇(chún)等(děng)有(yǒu)機溶(róng)劑
；在(zài)水中微溶
，但可在(zài)緩衝液中(zhōng)直接使用至(zhì)約5 mM濃度(dù)

保(bǎo)存(cún)條(tiáo)件(jiàn)：-20℃避(bì)光，防(fáng)潮(cháo)，密封幹(gān)燥(zào)保存
，避免反復凍融

間(jiān)隔(gé)臂長(cháng)度：24.7 Å（約(yuē)1.9 nm）
，屬於中(zhōng)等長度(dù)間(jiān)隔臂(bì)
，在空(kōng)間緩衝與分(fēn)子緊(jǐn)湊(còu)性(xìng)之(zhī)間取得(dé)良(liáng)好平衡(héng)

五，使(shǐ)用注意事(shì)項

僅限科(kē)研使用(yòng)
，嚴禁人體(tǐ)實驗(yàn)。取用時(shí)保持幹(gān)燥
，避(bì)免(miǎn)頻繁(fán)溶(róng)解和(hé)凍(dòng)幹。先用(yòng)DMSO配成儲備液再稀(xī)釋(shì)至(zhì)工作(zuò)濃度(dù)。

反應(yīng)pH控製(zhì)在(zài)5.5~7.5最(zuì)佳(jiā)
，避免強(qiáng)酸(suān)強(qiáng)鹼導(dǎo)致腙(zōng)鍵水解。避免使用(yòng)含Tris，甘氨酸(suān)等伯(bó)胺(àn)的(dí)緩(huǎn)衝(chōng)液（會(huì)與醛基競爭反應(yīng)）
，推(tuī)薦(jiàn)使(shǐ)用(yòng)磷(lín)酸鹽緩(huǎn)衝液或MES緩衝液。單(dān)克隆(lóng)抗體(tǐ)糖基化程(chéng)度(dù)通(tōng)常較(jiào)低(dī)
，使用前(qián)建(jiàn)議先驗證標(biāo)記效率(shuài)。

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