一(yī)，基本信(xìn)息

Biotin-Sulfo-NHS Ester，也稱(chēng)Sulfo-NHS-Biotin，中(zhōng)文(wén)名生物(wù)素-磺酸琥(hǔ)珀酰亞胺(àn)酯，CAS號(hào)119616-38-5。分子式(shì)C14H18N3NaO8S2，分子量(liáng)443.43，外(wài)觀為(wéi)白色至(zhì)淡黃色粉(fěn)末，純度通常≥95%。它是(shì)經典的(dí)水溶(róng)性(xìng)生物素(sù)化(huà)交聯劑(jì)，核心(xīn)結(jié)構由生物素(sù)基(jī)團，柔性(xìng)連接臂和磺(huáng)化NHS酯基團(tuán)三(sān)部分組(zǔ)成(chéng)。

二，核心(xīn)特點

高水溶(róng)性：這(zhè)是它區別(bié)於(yú)普通Biotin-NHS Ester的較大優(yōu)勢。磺(huáng)酸基(jī)團（-SO₃⁻）帶(dài)來強(qiáng)親水性，可直接(jiē)溶於水或(huò)PBS緩衝液中使用，無需DMSO，DMF等(děng)有機溶(róng)劑(jì)助溶(róng)，避免了有機(jī)溶劑(jì)對蛋(dàn)白質活性(xìng)的(dí)破(pò)壞。

膜不通(tōng)透性：磺(huáng)酸基團(tuán)帶負電荷，使(shǐ)分(fēn)子無法穿透細胞膜，因此(cǐ)隻(zhī)能標記暴(bào)露在(zài)細(xì)胞外(wài)表麵(miàn)的蛋白氨基，特(tè)別(bié)適(shì)合(hé)活(huó)細胞表麵(miàn)蛋白(bái)的特異(yì)性標(biāo)記(jì)。

高效(xiào)反應性：NHS酯端在(zài)pH 7.0-8.5的(dí)中(zhōng)性(xìng)至弱(ruò)鹼性條(tiáo)件下(xià)，與(yǔ)蛋(dàn)白質，抗體上的伯(bó)氨基（-NH₂，主(zhǔ)要是賴氨酸ε-氨基和N-末端α-氨基）快(kuài)速反應，形成(chéng)穩定(dìng)的(dí)酰(xiān)胺(àn)鍵，反(fǎn)應通(tōng)常30-60分鐘(zhōng)即(jí)可(kě)完成(chéng)。

超高親和力：生(shēng)物(wù)素端可(kě)與(yǔ)鏈黴親和素(sù)（Streptavidin）或親和素（Avidin）結合(hé)，Kd≈10⁻¹⁵ M，是已知較強的非共(gòng)價(jià)生物分子相互作用(yòng)之一。

低背(bèi)景幹(gān)擾(rǎo)：磺(huáng)酸基(jī)團(tuán)的負電性可減(jiǎn)少(shǎo)與(yǔ)帶正電(diàn)蛋白質或材料表(biǎo)麵的(dí)非特(tè)異(yì)性吸附(fù)，在(zài)復雜(zá)體(tǐ)係中(zhōng)能(néng)有效降(jiàng)低背(bèi)景信號。

三，主要應用

蛋白質與(yǔ)抗(kàng)體標記：在(zài)純水溶(róng)液(yè)中與蛋(dàn)白/抗(kàng)體(tǐ)的氨(ān)基(jī)反應，實(shí)現生(shēng)物素(sù)化(huà)，標記後(hòu)可通(tōng)過鏈(liàn)黴(méi)親(qīn)和素(sù)係(xì)統進行Western Blot，ELISA，免疫(yì)熒(yíng)光，流(liú)式(shì)細(xì)胞(bāo)術(shù)等檢測。

活細胞表麵蛋(dàn)白(bái)標記：由於膜不通透性，隻(zhī)能標記(jì)細(xì)胞外(wài)表麵蛋(dàn)白，是研(yán)究膜(mó)蛋白(bái)表(biǎo)達，分(fēn)布，內吞轉運的(dí)理(lǐ)想(xiǎng)工(gōng)具。標記(jì)後用熒光鏈黴(méi)親(qīn)和(hé)素(sù)成像。

Pull-down與親(qīn)和(hé)純(chún)化(huà)：標(biāo)記目標蛋白(bái)後，用鏈(liàn)黴(méi)親(qīn)和素(sù)磁(cí)珠(zhū)高效(xiào)捕獲，用(yòng)於(yú)蛋白質互作研究和蛋白(bái)質組(zǔ)學分(fēn)析。水(shuǐ)相操(cāo)作(zuò)保(bǎo)持(chí)蛋(dàn)白活性，背景更低。

核(hé)酸標記：與(yǔ)氨基(jī)修飾(shì)的DNA/RNA反應(yīng)，實(shí)現生(shēng)物(wù)素(sù)化核酸探針(zhēn)的製備(bèi)，用於FISH，核酸雜交(jiāo)芯(xīn)片，凝膠(jiāo)電(diàn)泳顯色(sè)等。

納米(mǐ)載體功能化(huà)：在脂質(zhì)體，納米(mǐ)粒(lì)，外泌(mì)體等(děng)載體表麵引入(rù)生物素(sù)標簽，PEG鏈段提供(gōng)隱形效應(yīng)，生物(wù)素端可進一步連(lián)接(jiē)靶(bǎ)向配體實(shí)現主(zhǔ)動靶向(xiàng)。

四，存儲與實驗注意(yì)事項

存儲(chǔ)條件(jiàn)：-20°C以下(xià)，幹(gān)燥(zào)，避(bì)光，密(mì)封保存(cún)。NHS酯對水和(hé)濕氣(qì)極度(dù)敏感(gǎn)，幹(gān)燥(zào)狀(zhuàng)態下(xià)穩(wěn)定(dìng)性較(jiào)好。

現(xiàn)配現用(yòng)：在水(shuǐ)相(xiāng)中(zhōng)NHS酯會(huì)緩(huǎn)慢水(shuǐ)解，配成溶(róng)液後建議(yì)1-2小時內(nèi)用完，不可提前(qián)配製儲存液。低溫（0-4°C）可適(shì)當(dāng)減緩水解(jiě)，但(dàn)不(bù)建議(yì)長期冰存已(yǐ)溶(róng)解(jiě)的(dí)溶(róng)液。

避免伯(bó)胺緩衝液：不可(kě)使(shǐ)用(yòng)含伯胺(àn)的(dí)緩(huǎn)衝(chōng)液（如(rú)Tris，甘氨酸），它(tā)們(mén)會與(yǔ)NHS酯(zhǐ)競爭(zhēng)反應。應使用(yòng)PBS或(huò)碳酸(suān)氫(qīng)鈉(nà)緩(huǎn)衝液（pH 8.0-8.5）。

摩爾(ěr)比優(yōu)化：通(tōng)常(cháng)使(shǐ)用(yòng)20-50倍摩(mó)爾過(guò)量(liáng)的(dí)試劑(jì)相對(duì)於蛋白(bái)質，過度(dù)標(biāo)記可能導(dǎo)致(zhì)蛋白聚(jù)集或(huò)活性(xìng)喪(sāng)失。

安(ān)全提(tí)示(shì)：僅供科研(yán)使(shǐ)用，不可(kě)用於人(rén)體。操(cāo)作時佩戴(dài)手套(tào)和(hé)護目鏡，避(bì)免(miǎn)吸(xī)入(rù)粉塵。

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