DBCO-PEG4-Tetrazine 的製備(bèi)主要(yào)基於(yú)點擊化學原理，通過 DBCO 基團與(yǔ)疊(dié)氮基(jī)團的反(fǎn)應，或甲基(jī)四嗪基團(tuán)與(yǔ) TCO 官(guān)能化分子(zǐ)的反應來實現，以下(xià)是具(jù)體製(zhì)備方(fāng)法(fǎ)：

1. DBCO 與疊氮基團的反應：

• 原(yuán)理：DBCO（二苯並環(huán)辛炔(quē)）是一種應(yīng)變促(cù)進(jìn)的環辛炔(quē)基(jī)團，能夠與疊氮基(jī)團（N₃）發(fā)生無(wú)銅點(diǎn)擊(jī)化(huà)學反應(yīng)（SPAAC），生(shēng)成穩定(dìng)的三唑(zuò)環結構。

• 條(tiáo)件：該反應在(zài)水中進行(háng)，反(fǎn)應迅速(sù)而定量，適用於(yú)製(zhì)備(bèi)納偶聯物。反(fǎn)應(yīng)對 pH 不敏感(gǎn)，無需特殊緩衝液或(huò)控(kòng)製(zhì) pH，在 4-11 的(dí) pH 範(fàn)圍內(nèi)效果(guǒ)好。

• 應用：通(tōng)過此(cǐ)反應，可以將 DBCO-PEG4-Tetrazine 與疊氮(dàn)化物修飾的(dí)生物分(fēn)子（如(rú)蛋白質，核酸(suān)等(děng)）進行偶聯。

2. 甲(jiǎ)基(jī)四嗪與 TCO 官(guān)能化分子的反應：

• 原(yuán)理(lǐ)：甲(jiǎ)基(jī)四嗪是一種高反應活性(xìng)的(dí)四嗪衍生(shēng)物(wù)，能夠與(yǔ)含有(yǒu)反(fǎn)式雙鍵的化(huà)合(hé)物（如反(fǎn)式環辛烯(xī)，TCO）發生(shēng)快(kuài)速(sù)的逆(nì)電子(zǐ)需求(qiú) Diels-Alder（IEDDA）反(fǎn)應(yīng)，生成(chéng)穩定的加合(hé)物(wù)。

• 條件(jiàn)：該反應(yīng)具有高(gāo)度(dù)的選(xuǎn)擇性和生物(wù)相容(róng)性，適用於(yú)活細胞(bāo)和活體內(nèi)的標記和成像(xiàng)。甲基四(sì)嗪基團可(kě)以在(zài)中性或(huò)微(wēi)鹼性(xìng) pH 值(zhí)下與(yǔ)伯胺(àn)反應(yīng)形(xíng)成共(gòng)價鍵(jiàn)。

• 應用：通過(guò)此反應，可(kě)以(yǐ)將(jiāng) DBCO-PEG4-Tetrazine 與 TCO 官能(néng)化的(dí)分子進(jìn)行偶聯(lián)，實(shí)現(xiàn)生物分(fēn)子(zǐ)的標記和(hé)動態監測。

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