磁珠法提取全血(xiě)gDNA的流程(chéng)主要分為(wéi)裂解，結合，洗滌，洗脫四個核心步驟，具體操作及(jí)原理如(rú)下(xià)：

一，裂解

• 操(cāo)作(zuò)：取200μL全(quán)血樣品，加入200μL裂(liè)解(jiě)液（含GuHCl/SDS）和(hé)10μL蛋(dàn)白(bái)酶K，充分混匀後於(yú)55°C水浴10分鐘。

• 原(yuán)理(lǐ)：裂解(jiě)液(yè)中(zhōng)的GuHCl和(hé)SDS能(néng)夠破(pò)壞(huài)細胞膜(mó)和核膜，使gDNA從(cóng)細胞中釋放(fàng)出來(lái)。同(tóng)時(shí)，加(jiā)入RNA酶A（10μg/mL）可(kě)去除RNA幹(gān)擾，確保提(tí)取(qǔ)的gDNA純度(dù)。

二，結合(hé)

• 操作(zuò)：加(jiā)入300μL結合緩(huǎn)衝液和(hé)20μL磁(cí)珠（使用(yòng)前顛倒(dǎo)或(huò)吹(chuī)吸混匀），顛倒混(hùn)匀(yún)10分鐘(zhōng)。將離心管置(zhì)於磁力架(jià)上1分(fēn)鐘，使磁珠被吸附(fù)，移(yí)走(zǒu)管內(nèi)液(yè)體(tǐ)。

• 原(yuán)理：調(tiáo)節(jié)pH至5.0-6.5（羧(suō)基磁珠最(zuì)佳(jiā)結(jié)合條件(jiàn)），創造(zào)高鹽(yán)環境，屏蔽DNA磷酸(suān)基(jī)團(tuán)的負(fù)電(diàn)荷，促進其(qí)與磁(cí)珠表麵(miàn)官(guān)能團（如羧(suō)基(jī)，氨(ān)基(jī)等）的(dí)結(jié)合。磁珠表麵修(xiū)飾的官能團通過靜電作(zuò)用或共(gòng)價(jià)鍵與(yǔ)DNA的磷(lín)酸(suān)骨架(jià)結合，實(shí)現特(tè)異性(xìng)吸附(fù)。

三(sān)，洗滌

• 操(cāo)作：加(jiā)入500μL洗滌緩衝液(yè)Ⅰ，顛倒(dǎo)混匀(yún)數次(cì)後利用(yòng)磁(cí)力(lì)架(jià)吸附磁珠，1分(fēn)鐘後(hòu)移(yí)走管(guǎn)內(nèi)液(yè)體。重復(fù)上述步(bù)驟(zhòu)，依(yī)次(cì)使用洗滌(dí)緩(huǎn)衝液(yè)Ⅱ和洗(xǐ)滌緩衝液Ⅲ進行洗滌。

• 原理：使(shǐ)用70%乙(yǐ)醇(chún)等洗滌(dí)液去(qù)除(chú)鹽(yán)分(fēn)和雜質（如(rú)蛋(dàn)白(bái)質(zhì)，多糖等）。通(tōng)過多(duō)次洗滌，確保磁珠表麵清潔(jié)，提高(gāo)gDNA的純度。

四(sì)，洗脫

• 操作：加(jiā)入50-100μL洗(xǐ)脫(tuō)緩(huǎn)衝液(yè)（如TE緩衝(chōng)液，pH 8.0），使(shǐ)磁(cí)珠重(zhòng)新懸(xuán)浮，55°C水(shuǐ)浴10分(fēn)鐘，其間(jiān)輕(qīng)輕晃動使DNA充分(fēn)洗脫。將(jiāng)離(lí)心管(guǎn)置於磁力架1分鐘，使磁(cí)珠被吸附，將(jiāng)液體轉移(yí)至新(xīn)的離心管(guǎn)中，得(dé)到純化(huà)的(dí)DNA產(chǎn)物。

• 原理(lǐ)：使用低(dī)鹽(yán)緩衝液（如(rú)TE緩衝液(yè)）改變(biàn)環(huán)境(jìng)，破(pò)壞靜(jìng)電(diàn)和(hé)氫鍵(jiàn)作(zuò)用(yòng)，使(shǐ)DNA從磁珠上(shàng)解(jiě)吸(xī)附(fù)下來。通過(guò)加(jiā)熱(rè)和輕輕(qīng)晃(huǎng)動，促進DNA的(dí)洗脫效率(shuài)。

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