一，核心(xīn)原(yuán)理

二(èr)，常(cháng)用製備方法(fǎ)（化學合成(chéng)法）

方法(fǎ) 1：NHS - 生物素活化法

步(bù)驟詳(xiáng)解

1. 原料(liào)準(zhǔn)備

• 18:1 PE：通常為(wéi)1,2 - 二(èr)油酰(xiān)基(jī) - sn - 甘(gān)油(yóu) - 3 - 磷酸(suān)乙醇(chún)胺（DOPE），因油(yóu)酰基（18:1 Δ9c）是最常見的(dí) 18 碳單不(bù)飽和(hé)脂肪(fáng)酸鏈(liàn)，可(kě)通(tōng)過商業購(gòu)買或(huò)實(shí)驗(yàn)室(shì)合(hé)成
  。

• 生(shēng)物素(sù)活化(huà)試劑：NHS - 生(shēng)物素（N-hydroxysuccinimide biotin，商(shāng)業(yè)可(kě)得，或自(zì)製(zhì)：生(shēng)物素(sù)與(yǔ) NHS 在碳二亞(yà)胺如 DCC 催化下反(fǎn)應生成）
  。

• 溶(róng)劑(jì)：選(xuǎn)用(yòng)磷(lín)脂(zhī)和生物素(sù)衍(yǎn)生(shēng)物均溶解(jiě)的有(yǒu)機溶(róng)劑(jì)，如(rú)氯(lǜ)仿 / 甲醇(chún)混合液(yè)（體積(jī)比 2:1） 或(huò)二氯甲烷
  。

• 催(cuī)化(huà)劑：加入有(yǒu)機(jī)鹼（如三乙(yǐ)胺）中(zhōng)和反應生成的酸，促(cù)進酰胺化(huà)反應
  。

2. 反應過(guò)程(chéng)

• 將(jiāng) DOPE（1 eq）溶(róng)於(yú)上述溶劑(jì)，加(jiā)入過量的(dí) NHS - 生(shēng)物素(sù)（1.2-1.5 eq，過量提高(gāo)反應率），再滴(dī)加(jiā)少量三(sān)乙胺（1-2 eq）
  。

• 室(shì)溫(wēn)下(xià)攪拌反(fǎn)應 4-12 小時(shí)（可通過(guò) TLC 監測(cè)反應進度，展開劑用氯仿(fǎng) / 甲醇(chún) / 水(shuǐ) = 65:25:4）
  。

• 反應原理(lǐ)：NHS - 生(shēng)物(wù)素的酯基與 DOPE 的(dí)氨基(jī)反應，釋放(fàng) NHS，形(xíng)成生物素 - PE 酰(xiān)胺(àn)鍵
  。

3. 產物純(chún)化

• 反應結(jié)束後，旋蒸(zhēng)除去溶劑(jì)，殘(cán)留固體用少(shǎo)量氯仿(fǎng)溶解(jiě)
  。

• 通過矽膠柱層析(xī)純化：以氯仿 / 甲醇混合(hé)液（初始比例(lì) 9:1，逐步提高甲(jiǎ)醇比(bǐ)例(lì)至 7:3）為(wéi)洗脫劑，收集(jí)含目標(biāo)產物的流分（TLC 檢(jiǎn)測，Rf 值(zhí)低(dī)於(yú)原(yuán)料 DOPE，因生物素增(zēng)加極性(xìng)）
  。

• 合(hé)並純(chún)流分，旋蒸(zhēng)幹(gān)燥(zào)，得到白色或類白(bái)色固體(tǐ)產(chǎn)物 18:1 BIOTINYL PE
  。

方法(fǎ) 2：EDC/NHS 聯用活化(huà)法

步驟要點

1. 溶(róng)劑(jì)選(xuǎn)用DMF（二甲基甲(jiǎ)酰(xiān)胺）或(huò)氯(lǜ)仿 / 甲醇混合液(yè)，避免(miǎn)水(shuǐ)過(guò)多（EDC 在水(shuǐ)中(zhōng)易(yì)水解）
   。

2. 依次(cì)加(jiā)入(rù) DOPE（1 eq），生物(wù)素(sù)（1.2 eq），EDC（1.5 eq），NHS（1.5 eq），室(shì)溫攪拌 8-16 小時(shí)
   。

3. 純(chún)化步(bù)驟同(tóng)方(fāng)法(fǎ) 1（矽(guī)膠柱層析）
   。

方法(fǎ) 3：酶(méi)促合成(chéng)法（輔(fǔ)助(zhù)方(fāng)法(fǎ)）

• 條件：在緩(huǎn)衝液(yè)（如(rú) PBS，pH 7.0-7.5）中(zhōng)，加(jiā)入酶(méi)（如胰(yí)脂肪(fáng)酶(méi)），DOPE 和(hé)生(shēng)物素，37℃反(fǎn)應 24-48 小(xiǎo)時(shí)
  。

• 缺點(diǎn)：反(fǎn)應(yīng)速率(shuài)慢(màn)，副產(chǎn)物較多，需(xū)嚴格(gé)控製酶活和 pH
  。

三(sān)，關鍵注意(yì)事項

1. 溶(róng)劑(jì)選擇：需(xū)兼顧磷脂(zhī)（疏(shū)水性）和生(shēng)物素(sù)衍生(shēng)物(wù)（中等極性(xìng)）的(dí)溶解性(xìng)，避免(miǎn)使用(yòng)強(qiáng)極性(xìng)溶劑（如(rú)純水）導致磷脂(zhī)析出
   。

2. 反(fǎn)應(yīng)條件：控製(zhì)溫度（室溫為(wéi)宜(yí)，高(gāo)溫(wēn)可能(néng)導致磷脂氧化或(huò)生物素(sù)分(fēn)解(jiě)）和 pH（弱鹼(jiǎn)性環境利於氨(ān)基(jī)親核攻(gōng)擊）
   。

3. 純(chún)化驗證：通(tōng)過核(hé)磁(cí)共(gòng)振(zhèn)（¹H NMR，檢(jiǎn)測生(shēng)物素(sù)特征峰 δ 4.3-4.5），質(zhì)譜(pǔ)（ESI-MS，目標分子量約(yuē) 1000-1100 Da）確認(rèn)產(chǎn)物(wù)結(jié)構
   。

關(guān)於(yú)我(wǒ)們(mén):

陝西(xī)星(xīng)貝愛科生(shēng)物(wù)科技經(jīng)營的(dí)產品種(zhǒng)類(lèi)包括有(yǒu)：合(hé)成(chéng)磷脂(zhī)，高分子(zǐ)聚(jù)乙二醇衍生(shēng)物(wù)，嵌段(duàn)共聚物，磁性納(nà)米顆(kē)粒(lì)，納米金(jīn)及納米金棒，近紅外熒光染料，活性(xìng)熒(yíng)光染(rǎn)料(liào)，熒(yíng)光標記物，蛋(dàn)白(bái)交(jiāo)聯(lián)劑，小分子(zǐ)PEG衍(yǎn)生(shēng)物，點擊化學產(chǎn)品(pǐn)，樹(shù)枝(zhī)狀聚合物(wù)，環糊(hū)精衍(yǎn)生物(wù)，大環配(pèi)體類(lèi)，熒(yíng)光量子(zǐ)點，透(tòu)明質(zhì)酸(suān)衍生物，石墨(mò)烯或(huò)氧化石(shí)墨烯(xī)，碳納米(mǐ)管，富勒烯，二氧化矽及介孔(kǒng)二(èr)氧(yǎng)化矽，聚合物微(wēi)球，近紅(hóng)外熒光染料(liào)，聚苯(běn)乙烯微(wēi)球(qiú)，上轉(zhuǎn)換納(nà)米發光(guāng)顆粒，MRI核磁(cí)造影產(chǎn)品(pǐn)，熒光(guāng)蛋白及(jí)熒光(guāng)探針等等
。

溫馨提示：僅(jǐn)用於(yú)科研(yán)，不能(néng)用於人(rén)體
！

同(tóng)係(xì)列：

1,2-二(èr)癸酰基-sn-甘(gān)油-3-磷脂(zhī)酰乙(yǐ)醇(chún)胺(àn),253685-27-7

二(èr)月(yuè)桂(guì)酰(xiān)磷脂酰絲氨酸DLPS(鈉鹽(yán)),208757-51-1

二肉豆蔻(kòu)酰磷(lín)脂(zhī)酰絲氨(ān)酸(鈉鹽)DMPS(Na),105405-50-3

1-硬脂(zhī)酰(xiān)-2-油酰磷脂(zhī)酰膽鹼(SOPC),56421-10-4

1-硬(yìng)脂(zhī)酰(xiān)-2-亞(yà)油(yóu)酰-sn-甘油(yóu)-3-磷脂(zhī)酰(xiān)乙醇胺(SLinPE),7266-53-7

1-硬脂酰-2-亞油酰(xiān)磷脂酰絲氨酸(鈉(nà)鹽)(SLinPS)，322647-11-0

DMG-C-mPEG2000，1019000-64-6

1,2-二肉(ròu)豆蔻(kòu)酰(xiān)-rac-甘(gān)油-3-甲氧基聚(jù)乙(yǐ)二(èr)醇2000，160743-62-4

1,2-二(èr)棕櫚(lǘ)酰磷(lín)脂酰乙(yǐ)醇胺(àn)-N-[3-(2-吡(pǐ)啶(dìng)二硫)丙(bǐng)酰(xiān)基(jī)](鈉(nà)鹽(yán))(DPPE-PDP)，474944-16-6

1,2-二油烷氧(yǎng)基-3-二甲(jiǎ)基氨基-丙烷(wán)(DODMA)，104162-47-2

1,2-二(èr)油酰(xiān)氧(yǎng)基-3-(二(èr)甲氨(ān)基(jī))丙烷(DODAP)，127512-29-2

(S)-DPPE| (S)-二棕(zōng)櫚酰磷(lín)脂酰乙醇胺(àn)(手(shǒu)性異構體)，71357-99-8

(S)-DPPE (S)-二(èr)棕(zōng)櫚酰(xiān)磷脂酰乙醇胺，71357-99-8