FITC - 環(huán)糊(hū)精(jīng)的製備過程一(yī)般如下(xià):
環糊(hū)精的選擇與預處理:根據具(jù)體需求(qiú)選擇(zé)合適的(dí)環糊精(jīng)類(lèi)型,如(rú) α-,β-,γ- 環糊(hū)精(jīng)等(děng),其中 β- 環(huán)糊精(jīng)應用(yòng)較為廣(guǎng)泛(fàn)。若環(huán)糊(hū)精(jīng)本(běn)身不(bù)含有可與 FITC 反(fǎn)應的活性基團(tuán),需先對其進行化學修(xiū)飾,引入如氨基(jī)等活性(xìng)基團(tuán)。例(lì)如,可通過(guò)將(jiāng)環(huán)糊(hū)精與(yǔ)氨基修飾劑(如(rú)氨(ān)基(jī)乙基化試(shì)劑)反(fǎn)應,在(zài)環(huán)糊精分子(zǐ)上(shàng)引入氨基.
FITC 溶液(yè)的配製(zhì):通(tōng)常將 FITC 溶解在適當的(dí)溶劑中,如無(wú)水二(èr)甲(jiǎ)基亞碸(DMSO)或磷(lín)酸鹽緩(huǎn)衝液(yè)(PBS)等,配(pèi)製(zhì)成(chéng)一(yī)定(dìng)濃度的溶液,一般濃度為(wéi) 1mg/ml 左右(yòu),且(qiě)需現用(yòng)現(xiàn)配,以防止(zhǐ) FITC 分(fēn)解失效.
反應(yīng)條件的(dí)確(què)定(dìng):將含有(yǒu)活性基團的環糊(hū)精(jīng)溶液與 FITC 溶液混合(hé),反應(yīng)一般在弱鹼(jiǎn)性條件下進(jìn)行,pH 值(zhí)通常(cháng)控(kòng)製在 8-9 左右,如(rú) pH 8.5 時反(fǎn)應效(xiào)率和穩定性較好(hǎo)。同時,反應(yīng)可在室(shì)溫或較低(dī)溫(wēn)度(dù)下進(jìn)行,如 4℃左(zuǒ)右,以避(bì)免(miǎn)溫度過(guò)高導(dǎo)致副反應(yīng)增(zēng)加.
反(fǎn)應過程(chéng):在(zài)避光(guāng)條件下,將 FITC 溶(róng)液緩慢地(dì)逐滴(dī)加入(rù)到(dào)環(huán)糊精(jīng)溶(róng)液(yè)中,邊加邊(biān)輕(qīng)輕(qīng)攪(jiǎo)拌,使(shǐ)二者充分混(hùn)合均(jūn)匀(yún),然(rán)後(hòu)在(zài)選定的溫度和 pH 條件下進行孵育反(fǎn)應。反應(yīng)時間根(gēn)據具(jù)體情況而(ér)定,一(yī)般(bān)需要數(shù)小時至(zhì)數十(shí)小時不(bù)等,例如 8-12 小(xiǎo)時,也可(kě)通過設置不同的(dí)時間梯(tī)度進(jìn)行預實驗,以確(què)定最佳反(fǎn)應(yīng)時間.
反(fǎn)應終止與純(chún)化(huà):反應(yīng)結(jié)束(shù)後,需加入(rù)適(shì)量(liáng)的(dí)終(zhōng)止劑終止(zhǐ)反應(yīng),如氯化銨等,使(shǐ)反應(yīng)體係中(zhōng)的未(wèi)反應 FITC 失活(huó)。然(rán)後可(kě)采(cǎi)用透(tòu)析法,凝(níng)膠(jiāo)過(guò)濾色譜(pǔ)法(fǎ),高效(xiào)液相色譜法等對(duì)標記(jì)產物(wù)進行(háng)純(chún)化(huà),以去除未反(fǎn)應的 FITC,環糊精以(yǐ)及(jí)其他雜(zá)質(zhì),得(dé)到高(gāo)純度(dù)的(dí) FITC - 環(huán)糊精.
產物(wù)鑒定(dìng)與檢測(cè):使(shǐ)用熒(yíng)光光譜(pǔ)儀對(duì)純化(huà)後的(dí) FITC - 環糊(hū)精產物進(jìn)行(háng)熒(yíng)光(guāng)檢測(cè),激(jī)發波長一(yī)般為 490 - 495nm,發射波(bō)長為(wéi) 515 - 525nm,觀察其(qí)熒光強度(dù)和(hé)光譜特(tè)征是否符合預期,以確定標記是否(fǒu)成(chéng)功(gōng)以及(jí)標記效(xiào)率的高低 。此外,還(huán)可結合(hé)其(qí)他分析方(fāng)法(fǎ),如(rú)高效(xiào)液(yè)相(xiāng)色(sè)譜(pǔ)(HPLC),質(zhì)譜(MS)等對標(biāo)記(jì)產物(wù)的(dí)純度(dù),結(jié)構(gòu)等(děng)進(jìn)行進(jìn)一(yī)步(bù)的(dí)鑒(jiàn)定(dìng)和分析,以確保獲(huò)得高(gāo)質量的 FITC - 環糊(hū)精標(biāo)記產物.
關(guān)於我(wǒ)們(mén):
陝(shǎn)西星(xīng)貝愛科生物科技經營的(dí)產(chǎn)品種類(lèi)包括(kuò)有(yǒu):合成磷脂,高分(fēn)子聚(jù)乙(yǐ)二(èr)醇衍生(shēng)物,嵌(qiàn)段(duàn)共(gòng)聚物,磁性納米(mǐ)顆粒,納(nà)米金及(jí)納米金棒,近紅外熒(yíng)光染料,活性(xìng)熒(yíng)光(guāng)染(rǎn)料,熒光(guāng)標記(jì)物,蛋白交聯劑(jì),小(xiǎo)分(fēn)子PEG衍生(shēng)物(wù),點擊化學(xué)產品(pǐn),樹枝狀聚(jù)合物,環(huán)糊(hū)精(jīng)衍生(shēng)物,大環配體(tǐ)類(lèi),熒(yíng)光量(liáng)子點,透(tòu)明(míng)質(zhì)酸衍生物,石(shí)墨烯或氧化石(shí)墨烯(xī),碳納米管(guǎn),富(fù)勒烯,二氧化(huà)矽及介(jiè)孔(kǒng)二(èr)氧(yǎng)化矽,聚合(hé)物微球(qiú),近紅外(wài)熒光染(rǎn)料,聚(jù)苯乙(yǐ)烯(xī)微(wēi)球,上轉(zhuǎn)換納(nà)米(mǐ)發光(guāng)顆粒,MRI核(hé)磁(cí)造(zào)影產品,熒(yíng)光蛋白(bái)及熒(yíng)光探針(zhēn)等等。
溫馨提(tí)示:供(gōng)應(yīng)產(chǎn)品僅(jǐn)用(yòng)於科研,不(bù)能(néng)用(yòng)於人體!
相(xiāng)關(guān)產(chǎn)品(pǐn):
CY5-牛磺(huáng)膽(dǎn)酸鈉,CY5-Sodium taurocholate
FITC-3-酰脲丙(bǐng)酸,FITC-3-UREIDOPROPIONIC ACID
Cy3-海(hǎi)藻糖(táng),CY3-Trehalose
FITC-Casein,FITC-酪蛋(dàn)白
Cy5-雌(cí)二醇(chún),CY5-β-Estradiol
Cy5-黃芩素,CY5-Baicalein
FITC-甲(jiǎ)硫氨(ān)酸(suān),FITC-Methionine
Cy5-甜(tián)菊柑,CY5-Stevioside
FITC-羧甲基纖(xiān)維(wéi)素,FITC-CMC
DBCO-β環糊精,DBCO-β Cyclodextrin,DBCO-CD