FITC - 胱(guāng)氨(ān)酸合(hé)成(chéng)後(hòu)的(dí)純化方法主(zhǔ)要有以下幾(jī)種：

1.柱(zhù)層(céng)析法

凝膠(jiāo)過(guò)濾柱層(céng)析：凝膠(jiāo)過濾柱層(céng)析(xī)是根(gēn)據(jù)分子大小進行(háng)分(fēn)離純化的(dí)方法。常用的凝(níng)膠有 Sephadex G 係列，Superdex 係列(liè)等(děng)。將反應(yīng)混合物(wù)上(shàng)樣(yàng)到(dào)凝膠過濾柱後，小分子的(dí)雜質(zhì)如(rú)未反應(yīng)的 FITC，緩(huǎn)衝(chōng)液中(zhōng)的鹽(yán)離子等會先被洗脫下(xià)來(lái)，而相(xiāng)對分(fēn)子(zǐ)質量(liáng)較大的 FITC - 胱(guāng)氨酸(suān)則(zé)會在(zài)後(hòu)麵(miàn)被洗(xǐ)脫，從而實現(xiàn)分離純化。例(lì)如，使用 Sephadex G-25 凝膠(jiāo)過(guò)濾柱，以(yǐ)水或緩衝(chōng)液為洗脫(tuō)劑，可(kě)以(yǐ)有(yǒu)效地(dì)去除小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)雜質.

離子交(jiāo)換(huàn)柱層析：如(rú)果 FITC - 胱氨(ān)酸與雜質在(zài)離子(zǐ)性質(zhì)上有(yǒu)差異(yì)，可采用離子(zǐ)交(jiāo)換柱(zhù)層(céng)析(xī)。如(rú) FITC - 胱(guāng)氨酸帶有(yǒu)正(zhèng)電(diàn)荷或(huò)負電荷(hé)，可選擇(zé)相應的陰離子(zǐ)交換樹(shù)脂(zhī)或陽離(lí)子交換樹脂。上樣後，通過改變洗脫液的離子強(qiáng)度或 pH 值，使(shǐ) FITC - 胱(guāng)氨酸(suān)與雜質(zhì)依次從柱(zhù)上(shàng)洗脫(tuō)下(xià)來(lái)，達(dá)到(dào)分(fēn)離(lí)的目的。

2.高效液相色譜法（HPLC）

反(fǎn)相(xiāng)高效液(yè)相(xiāng)色譜(pǔ)：反(fǎn)相 HPLC 是常用(yòng)的純(chún)化方法之(zhī)一，使用 C18 等(děng)反相色(sè)譜柱(zhù)，以水和(hé)有(yǒu)機(jī)溶劑（如甲(jiǎ)醇，乙腈(jīng)）的混合(hé)溶液為流動相(xiāng)。在(zài)這(zhè)種條件(jiàn)下，FITC - 胱(guāng)氨酸(suān)會根(gēn)據其在流動相(xiāng)和固定相之(zhī)間的分(fēn)配係數不(bù)同而(ér)得到(dào)分(fēn)離。通過優(yōu)化流動(dòng)相(xiāng)的(dí)組(zǔ)成(chéng)，梯(tī)度(dù)洗脫(tuō)程序等(děng)，可以獲得(dé)較(jiào)高純度(dù)的 FITC - 胱氨酸(suān)。例(lì)如，采用乙腈(jīng) - 水(shuǐ)梯(tī)度(dù)洗(xǐ)脫，可使 FITC - 胱氨酸與其他(tā)雜(zá)質有效分(fēn)離.

正相(xiāng)高效液相(xiāng)色(sè)譜(pǔ)：正相 HPLC 使用矽膠(jiāo)等極性(xìng)固定相和非極(jí)性(xìng)或(huò)弱(ruò)極(jí)性(xìng)的流動(dòng)相(xiāng)，適用於(yú)分(fēn)離具有不同極(jí)性(xìng)的(dí)化(huà)合物。如(rú)果(guǒ) FITC - 胱(guāng)氨酸(suān)及其雜(zá)質在極(jí)性上有明(míng)顯(xiǎn)差異，正相 HPLC 也可(kě)用(yòng)於其(qí)純化。

3.透析(xī)法(fǎ)

原(yuán)理：透析(xī)是(shì)利用(yòng)半透(tòu)膜的(dí)選擇性(xìng)透過作用(yòng)，將小(xiǎo)分子雜(zá)質（如(rú)未反(fǎn)應(yīng)的 FITC，鹽等）從(cóng)大(dà)分子的(dí) FITC - 胱氨酸溶(róng)液中分離出去。把反應混(hùn)合物裝入透析袋中(zhōng)，然後將透析袋置(zhì)於大量的(dí)緩衝液(yè)或(huò)蒸餾(liù)水中，小分(fēn)子(zǐ)雜質會透(tòu)過(guò)透析(xī)袋(dài)擴(kuò)散到(dào)外部溶(róng)液(yè)中，而(ér) FITC - 胱氨(ān)酸則(zé)保留在透析(xī)袋(dài)內，經(jīng)過多次更(gēng)換(huàn)外部溶液(yè)，可達到(dào)純(chún)化的(dí)效果.

透(tòu)析(xī)袋(dài)的(dí)選擇(zé)：根(gēn)據(jù) FITC - 胱氨(ān)酸(suān)的(dí)分子大(dà)小，選擇(zé)合適截留分子量(liáng)的透(tòu)析(xī)袋(dài)，一般截留分子量應小於(yú) FITC - 胱(guāng)氨酸的(dí)分子量，以防(fáng)止目標產物(wù)的泄漏。

4.溶劑萃(cuì)取(qǔ)法

原(yuán)理(lǐ)：利(lì)用(yòng) FITC - 胱氨酸在(zài)不同溶劑(jì)中的溶解度差異(yì)進(jìn)行(háng)分離(lí)純化。選(xuǎn)擇一種對 FITC - 胱(guāng)氨酸溶(róng)解度較(jiào)大(dà)，而對雜質溶(róng)解度較(jiào)小(xiǎo)的(dí)溶劑，將(jiāng)反(fǎn)應(yīng)混(hùn)合物與(yǔ)該溶劑(jì)混合振蕩或(huò)攪拌，使(shǐ) FITC - 胱(guāng)氨酸轉移(yí)到(dào)溶(róng)劑相中，然(rán)後通過分(fēn)液(yè)漏(lòu)鬥等分離(lí)工具(jù)將溶劑相(xiāng)和(hé)雜(zá)質(zhì)相(xiāng)分離，再對溶劑相進行(háng)進(jìn)一步(bù)處理(lǐ)，如蒸發濃縮等，得(dé)到純(chún)化的 FITC - 胱氨(ān)酸.

萃取溶(róng)劑的(dí)選(xuǎn)擇：常(cháng)用(yòng)的萃取溶(róng)劑(jì)有乙(yǐ)酸乙酯(zhǐ)，氯(lǜ)仿，二氯(lǜ)甲烷等有(yǒu)機(jī)溶(róng)劑，但(dàn)需(xū)注意這(zhè)些(xiē)有(yǒu)機溶(róng)劑的毒性和揮(huī)發(fā)性，操作(zuò)時要(yào)在通風良(liáng)好的(dí)環(huán)境中(zhōng)進(jìn)行(háng)。

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CY5-穀氨(ān)酸，CY5-L-Glutamic acid

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CY5-去(qù)氧膽(dǎn)酸,CY5-Deoxycholic acid

Cy5.5-DXMS,CY5.5-地(dì)塞(sāi)米鬆(sōng)

Cy3-尿苷,CY3-Uridine

CY5-牛磺膽(dǎn)酸鈉,CY5-Sodium taurocholate

FITC-3-酰脲丙酸,FITC-3-UREIDOPROPIONIC ACID

Cy3-海(hǎi)藻糖(táng),CY3-Trehalose

FITC-Casein,FITC-酪蛋(dàn)白(bái)