1.細胞(bāo)毒性(xìng)測試(shì)

MTT 法（四(sì)唑鹽(yán)比色法(fǎ)）

將細(xì)胞(bāo)接(jiē)種(zhǒng)於 96 孔板(bǎn)中，培(péi)養至合適(shì)密(mì)度（例如(rú)，對(duì)數(shù)生(shēng)長期(qī)細胞(bāo)）。設(shè)置不(bù)同 CY2 - 牛血(xiě)清白蛋(dàn)白（CY2 - BSA）濃度梯度(dù)的(dí)實驗(yàn)組，同(tóng)時設置(zhì)空白對(duì)照組(zǔ)（隻含細胞(bāo)和(hé)培(péi)養基）和陰(yīn)性對照組(zǔ)（含未(wèi)標(biāo)記(jì)的 BSA 和細(xì)胞，培養(yǎng)基）。

將(jiāng) CY2 - BSA 加入(rù)實驗(yàn)組孔(kǒng)中，繼續培(péi)養一(yī)段時間(jiān)（如 24 - 48 小時(shí)）。然後(hòu)向(xiàng)每(měi)孔加入 MTT 溶(róng)液，繼(jì)續(xù)孵育(yù) 3 - 4 小(xiǎo)時，使(shǐ) MTT 被(bèi)活細(xì)胞(bāo)中的綫粒體琥(hǔ)珀(pò)酸(suān)脫氫(qīng)酶還(huán)原為不(bù)溶(róng)性(xìng)的藍紫色甲(jiǎ)臢結(jié)晶(jīng)。棄去(qù)上清(qīng)液(yè)，每(měi)孔加入 DMSO 溶(róng)解甲臢(zā)結晶(jīng)，用酶(méi)標儀在(zài) 490nm 波(bō)長處(chǔ)測量吸(xī)光(guāng)度。

根(gēn)據(jù)吸光度計算細(xì)胞存(cún)活率（細(xì)胞存(cún)活率 =(實驗(yàn)組(zǔ)吸光度 - 空白(bái)組吸(xī)光度(dù))/(陰(yīn)性(xìng)對(duì)照組吸光度(dù) - 空白組吸(xī)光度)×100%）。選擇細(xì)胞存活率在一定(dìng)範(fàn)圍(wéi)內（如(rú) 80% 以上）的(dí) CY2 - BSA 濃度，初步確定(dìng)為安全(quán)濃(nóng)度(dù)範圍。

Live/Dead 細(xì)胞染(rǎn)色法

同樣將細胞接種(zhǒng)並設(shè)置(zhì) CY2 - BSA 濃度梯(tī)度(dù)實驗(yàn)組(zǔ)，空(kōng)白(bái)對(duì)照(zhào)組和陰(yīn)性對照組。將(jiāng) CY2 - BSA 加入實(shí)驗(yàn)組(zǔ)培(péi)養後，用(yòng) Live/Dead 細(xì)胞(bāo)染色試劑(jì)盒(hé)對細(xì)胞(bāo)進行染(rǎn)色(sè)。

活細(xì)胞被(bèi)染(rǎn)成綠(lǜ)色(sè)，死(sǐ)細胞被染成(chéng)紅(hóng)色。通過熒(yíng)光顯(xiǎn)微鏡觀(guān)察(chá)細(xì)胞染色情(qíng)況(kuàng)，統(tǒng)計活(huó)細胞(bāo)和(hé)死細胞(bāo)的(dí)比例(lì)。確定使細胞死亡率較低的 CY2 - BSA 濃(nóng)度(dù)範(fàn)圍(wéi)。

2.熒光(guāng)強度(dù)測(cè)試

體外(wài)實(shí)驗

準備(bèi)一(yī)係(xì)列(liè)不同(tóng)濃度的 CY2 - BSA 溶(róng)液(yè)，在固定激發(fā)波長(cháng)（CY2 的激發波(bō)長一(yī)般(bān)在(zài) 488 - 495nm 左(zuǒ)右）下(xià)，使用(yòng)熒光光譜儀測量其(qí)熒(yíng)光(guāng)發(fā)射強度(dù)（CY2 的熒光發(fā)射波長(cháng)在 500 - 520nm 左(zuǒ)右(yòu)）。

繪製(zhì)熒光強度 - 濃度(dù)曲(qū)綫，隨(suí)著(zhuó) CY2 - BSA 濃(nóng)度增加(jiā)，熒(yíng)光強度通常會增(zēng)加(jiā)，但當濃度過高時(shí)，可能會出(chū)現熒光自猝滅(miè)現象，即熒光強(qiáng)度不再(zài)隨(suí)濃度增加(jiā)而綫(xiàn)性增(zēng)加，甚至下降(jiàng)。選擇熒光(guāng)強度增加且(qiě)未出現(xiàn)明顯(xiǎn)自(zì)猝滅的(dí)濃(nóng)度(dù)範圍，這個範(fàn)圍通常(cháng)是比(bǐ)較合(hé)適的(dí)標(biāo)記(jì)濃度範(fàn)圍。

體(tǐ)內實驗（以小動物成像(xiàng)為例(lì)）

將不同濃度(dù)的 CY2 - BSA 通(tōng)過(guò)合適的途徑（如(rú)靜脈(mài)注(zhù)射，腹腔注射等(děng)）注(zhù)入實驗動物(wù)體內(nèi)。在注射(shè)後(hòu)的(dí)不(bù)同時間點(diǎn)，使用(yòng)體內成像係(xì)統(tǒng)在(zài) CY2 的(dí)熒光發(fā)射波長範(fàn)圍(wéi)內進(jìn)行成(chéng)像。

觀察(chá)不同濃(nóng)度下(xià)熒光信號在(zài)體(tǐ)內(nèi)的分布(bù)和(hé)強(qiáng)度(dù)變化。選擇既能(néng)產生(shēng)足(zú)夠強的可檢(jiǎn)測(cè)熒光信(xìn)號，又(yòu)不(bù)會因濃度過高導(dǎo)致非(fēi)特(tè)異性結合和(hé)背景信號過強的 CY2 - BSA 濃度。

3.標(biāo)記(jì)效率測試(shì)

光譜法(fǎ)結合蛋(dàn)白定(dìng)量法

采(cǎi)用不同濃度的 CY2 - BSA 進行標(biāo)記反應(yīng)，反應完成後(hòu)，通(tōng)過紫外 - 可見(jiàn)分光(guāng)光(guāng)度計(jì)測(cè)量 CY2 的(dí)吸收峰（在(zài) 488 - 495nm 左右）強度(dù)來(lái)估(gū)算 CY2 的含(hán)量(liáng)，同(tóng)時(shí)使用(yòng)蛋白定量方(fāng)法（如(rú)考馬斯(sī)亮藍法，BCA 法(fǎ)等(děng)）確定 BSA 的(dí)含量。

根(gēn)據 CY2 和 BSA 的含(hán)量(liáng)計(jì)算(suàn)標(biāo)記效率(shuài)（標記效率(shuài) =（實際(jì)標記的 CY2 摩爾(ěr)數 / 理(lǐ)論上(shàng)可標記的 CY2 摩爾數(shù)）×100%）。選擇(zé)標(biāo)記效(xiào)率(shuài)較高的 CY2 - BSA 濃度(dù)作(zuò)為最(zuì)佳標記(jì)濃度。

4.電(diàn)泳結合(hé)熒光成像法

對(duì)不同(tóng)濃度 CY2 - BSA 標(biāo)記後的(dí)產物(wù)進(jìn)行聚丙烯(xī)酰胺凝膠(jiāo)電泳(yǒng)（SDS - PAGE）。由於 CY2 帶有熒(yíng)光，通過熒光成像(xiàng)係統觀(guān)察電泳後(hòu)的(dí)凝膠(jiāo)，比較(jiào)不同(tóng)濃度標記產物(wù)的條帶熒(yíng)光強度和位(wèi)置。

標記效(xiào)率(shuài)高(gāo)的(dí) CY2 - BSA 濃度對應(yīng)的條(tiáo)帶(dài)熒(yíng)光強度(dù)相對(duì)較高且條帶位置符(fú)合(hé)預期(qī)（CY2 標記後(hòu) BSA 分(fēn)子量增(zēng)加），綜(zōng)合(hé)判(pàn)斷選(xuǎn)擇(zé)最佳(jiā)標記(jì)濃度(dù)。

關於我們:

陝西星(xīng)貝(bèi)愛科(kē)生(shēng)物(wù)科(kē)技(jì)經營(yíng)的(dí)產品種類(lèi)包括有(yǒu)
：合(hé)成(chéng)磷(lín)脂(zhī)，高(gāo)分(fēn)子(zǐ)聚(jù)乙二醇(chún)衍生物(wù)，嵌(qiàn)段(duàn)共聚物，磁性(xìng)納(nà)米顆(kē)粒，納(nà)米(mǐ)金及納(nà)米金(jīn)棒，近(jìn)紅(hóng)外熒光(guāng)染料(liào)，活性(xìng)熒光染料，熒光標記(jì)物，蛋白(bái)交(jiāo)聯(lián)劑(jì)，小分(fēn)子(zǐ)PEG衍生(shēng)物，點(diǎn)擊化(huà)學(xué)產(chǎn)品(pǐn)，樹枝狀聚(jù)合(hé)物，環(huán)糊(hū)精衍生物，大(dà)環配(pèi)體類，熒(yíng)光量子(zǐ)點，透(tòu)明質酸衍生物，石墨(mò)烯(xī)或(huò)氧化(huà)石墨烯，碳納米管，富勒(lè)烯，二氧(yǎng)化(huà)矽及介(jiè)孔(kǒng)二氧(yǎng)化(huà)矽，聚合物微(wēi)球，近(jìn)紅(hóng)外(wài)熒光染料(liào)，聚苯乙烯微球(qiú)，上轉(zhuǎn)換納米(mǐ)發光顆粒(lì)，MRI核磁造影產品，熒光(guāng)蛋白(bái)及熒(yíng)光探(tàn)針(zhēn)等等(děng)。

溫(wēn)馨提示(shì)
：供應產品僅(jǐn)用於科(kē)研，不(bù)能(néng)用於(yú)人(rén)體！

相(xiāng)關產(chǎn)品
：

CY5-二十碳(tàn)五烯(xī)酸(suān),CY5-EPA

CY5-左旋肉鹼(jiǎn)，CY5-L(-)-Carnitine

CY5-C75,反(fǎn)-4-羧(suō)基-5-辛基(jī)-3-甲基-丁內(nèi)酯

FITC-1,2-DISTEAROYL-SN-GLYCEROL

FITC-5-氟尿嘧啶(dìng)核苷,FITC-5-Fluorouridine

FITC-肝(gān)素,FITC-Heparin

Cy5-地(dì)塞(sāi)米(mǐ)鬆,CY5-Dexamethasone,CY5-DXMS

Cy2-柚皮(pí)苷

羅丹(dān)明b-甘氨酸