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如何(hé)驗(yàn)證 FITC-氨甲(jiǎ)環(huán)酸(suān)的標記(jì)效(xiào)果(guǒ)?

2024-11-16 [185]

FITC-氨甲環酸(suān)|FITC-Tranexamic Acid

1.熒(yíng)光(guāng)光(guāng)譜分析

激(jī)發和發(fā)射(shè)波長檢(jiǎn)測:使用熒光分(fēn)光光度計(jì)對 FITC - 氨(ān)甲環(huán)酸進(jìn)行(háng)檢測。FITC 的典型(xíng)激發(fā)波(bō)長在 490 - 495nm 之間,發射(shè)波長(cháng)在(zài) 520 - 530nm 左右。如(rú)果標(biāo)記(jì)成(chéng)功(gōng),當用 490 - 495nm 的(dí)光(guāng)激發(fā)時,應(yīng)該(gāi)能檢(jiǎn)測(cè)到 520 - 530nm 的(dí)熒光(guāng)發射峰。並(bìng)且可以(yǐ)將標記後的化合物(wù)與(yǔ)未標記(jì)的(dí) FITC 和(hé)氨甲環酸(suān)分(fēn)別(bié)進行比較,未標記的氨甲環酸(suān)在相(xiāng)應(yīng)波(bō)長(cháng)範圍內不應有熒光(guāng)發射(shè),而標記後(hòu)的化合物(wù)熒光(guāng)強度(dù)應明(míng)顯高於未(wèi)標記(jì)的氨(ān)甲環酸,從而驗證(zhèng) FITC 是否(fǒu)成(chéng)功連接到(dào)氨甲環酸上(shàng)產(chǎn)生熒光。

熒(yíng)光(guāng)強度定(dìng)量(liáng):除(chú)了檢測(cè)波長(cháng),還可以(yǐ)比(bǐ)較(jiào)不同(tóng)濃度的(dí) FITC - 氨(ān)甲環酸溶液的熒光強(qiáng)度。一般來說,在(zài)一定範圍(wéi)內,隨著(zhuó) FITC - 氨(ān)甲環(huán)酸濃度的增加,熒光強(qiáng)度應該(gāi)呈(chéng)綫性(xìng)增(zēng)加(jiā)。通過製(zhì)作標準曲(qū)綫,即繪製熒光強(qiáng)度(dù)與濃(nóng)度(dù)的(dí)關係(xì)曲(qū)綫(xiàn),將實測樣品(pǐn)的熒(yíng)光強度代(dài)入(rù)標(biāo)準(zhǔn)曲綫(xiàn)中(zhōng),可(kě)以估算(suàn)標記產物的濃度(dù),也可(kě)以驗證(zhèng)標記的一致(zhì)性(xìng)和穩定(dìng)性。

2.紫外(wài) - 可見(jiàn)吸收光譜分(fēn)析(xī)

FITC 在紫外(wài) - 可見區(qū)域有(yǒu)特征吸(xī)收(shōu)峰,通(tōng)常在 490 - 495nm 附(fù)近,這(zhè)與(yǔ)它的激發波長相近。通過(guò)紫外(wài) - 可見(jiàn)分光光(guāng)度(dù)計(jì)測量(liáng) FITC - 氨(ān)甲(jiǎ)環酸的(dí)吸(xī)收(shōu)光(guāng)譜,若在(zài)該波長(cháng)附(fù)近(jìn)出(chū)現(xiàn)吸收峰(fēng),且吸收強度與熒(yíng)光強(qiáng)度(dù)變(biàn)化趨(qū)勢相(xiāng)關(即(jí)隨著標(biāo)記程度(dù)的增(zēng)加(jiā),吸(xī)收峰強(qiáng)度增加),可(kě)以作為(wéi)標(biāo)記成(chéng)功的(dí)一(yī)個佐證(zhèng)。同(tóng)時(shí),將其與未標(biāo)記的氨(ān)甲環酸和 FITC 進(jìn)行對比(bǐ),未標記(jì)的氨甲環酸在該(gāi)波長區域通(tōng)常沒有明顯吸(xī)收峰,這(zhè)樣(yàng)可(kě)以(yǐ)更(gēng)清(qīng)楚地(dì)驗證 FITC 與氨甲環(huán)酸的結合(hé)。

3.高效(xiào)液相(xiāng)色譜(HPLC)分(fēn)析

保留時間對比:使(shǐ)用(yòng) HPLC 對(duì) FITC - 氨甲環酸,未(wèi)標記的(dí) FITC 和(hé)氨甲(jiǎ)環酸(suān)進(jìn)行(háng)分(fēn)離和(hé)分(fēn)析。由於 FITC - 氨甲(jiǎ)環(huán)酸(suān)的(dí)結(jié)構與未(wèi)標記的化合(hé)物(wù)不同,它在色譜柱中的保留時(shí)間也會(huì)不同(tóng)。通過比(bǐ)較標(biāo)記(jì)前(qián)後化合物(wù)的(dí)保留時(shí)間,可以判(pàn)斷(duàn)標(biāo)記(jì)是否成功(gōng)。一般來說,FITC - 氨(ān)甲環酸的(dí)保(bǎo)留時間(jiān)會(huì)介(jiè)於 FITC 和氨(ān)甲(jiǎ)環酸(suān)之間,或(huò)者(zhě)與兩(liǎng)者都不(bù)同,這取決(jué)於它(tā)們(mén)的化(huà)學結構和色(sè)譜(pǔ)柱的(dí)性質。

純(chún)度檢(jiǎn)測:HPLC 還可(kě)以用(yòng)於檢測(cè) FITC - 氨甲環酸(suān)的(dí)純度。如果標記過(guò)程中(zhōng)有未(wèi)反應(yīng)的 FITC 或(huò)氨甲環酸(suān),或(huò)者產(chǎn)生(shēng)了其(qí)他雜質,在色譜(pǔ)圖(tú)上會(huì)出現(xiàn)相(xiāng)應的(dí)峰(fēng)。純度較高的(dí) FITC - 氨甲(jiǎ)環(huán)酸(suān)應(yīng)該(gāi)隻有(yǒu)一(yī)個主(zhǔ)峰(fēng),且峰形(xíng)良好,通(tōng)過計(jì)算主峰(fēng)麵積(jī)占(zhān)總峰麵積的比(bǐ)例(lì)可(kě)以確(què)定其(qí)純度(dù),從(cóng)而驗證標記(jì)的(dí)質量(liáng)。

4.質譜(MS)分析

分子量測定(dìng):通過質譜分(fēn)析可(kě)以準確測定(dìng) FITC - 氨(ān)甲(jiǎ)環酸的(dí)分(fēn)子量。FITC 的分子量(liáng)約(yuē)為(wéi) 389.38Da,氨甲(jiǎ)環(huán)酸的分子量(liáng)約(yuē)為 157.21Da,標記後的化(huà)合(hé)物分(fēn)子(zǐ)量應該是兩者分子量之和(hé)減(jiǎn)去(qù)一個(gè)水分(fēn)子(zǐ)的(dí)分(fēn)子(zǐ)量(因為反應過(guò)程中有一(yī)個(gè)水分子生(shēng)成(chéng)),即約為 546.59Da。如果(guǒ)質(zhì)譜結果顯(xiǎn)示的分子量(liáng)與(yǔ)理(lǐ)論(lùn)計(jì)算(suàn)值相符(fú),說明標(biāo)記成(chéng)功(gōng)。

碎片離子(zǐ)分(fēn)析(xī):質譜還可以(yǐ)分析(xī) FITC - 氨(ān)甲環酸的碎(suì)片(piàn)離(lí)子(zǐ),通過比(bǐ)較碎片離子的質荷比和(hé)豐度與理(lǐ)論(lùn)推測的(dí)結(jié)果(guǒ),可以進一步(bù)驗(yàn)證化合物的(dí)結構,確定 FITC 與(yǔ)氨(ān)甲環酸(suān)的連接(jiē)方(fāng)式(shì)是否正確。

關於(yú)我們(mén):

陝西(xī)星貝(bèi)愛科(kē)生物科技(jì)經(jīng)營(yíng)的(dí)產品(pǐn)種(zhǒng)類包括有:合成(chéng)磷脂,高分(fēn)子(zǐ)聚乙(yǐ)二醇(chún)衍生物,嵌段共(gòng)聚物,磁(cí)性(xìng)納米顆粒(lì),納米金及納(nà)米(mǐ)金(jīn)棒,近(jìn)紅(hóng)外熒(yíng)光(guāng)染料(liào),活性(xìng)熒光染料,熒(yíng)光(guāng)標記(jì)物(wù),蛋(dàn)白(bái)交聯(lián)劑(jì),小(xiǎo)分(fēn)子PEG衍生物,點(diǎn)擊化學產品,樹枝(zhī)狀聚合(hé)物,環糊(hū)精衍生物(wù),大環(huán)配體(tǐ)類,熒(yíng)光量子(zǐ)點,透(tòu)明質酸(suān)衍(yǎn)生物,石墨(mò)烯或氧化石墨(mò)烯(xī),碳(tàn)納米(mǐ)管,富勒(lè)烯(xī),二(èr)氧化矽及介孔二氧化(huà)矽,聚合物微球,近紅外(wài)熒(yíng)光(guāng)染料,聚(jù)苯(běn)乙(yǐ)烯(xī)微(wēi)球,上轉(zhuǎn)換納(nà)米(mǐ)發(fā)光顆粒,MRI核磁造影產(chǎn)品,熒光蛋(dàn)白及熒(yíng)光探(tàn)針(zhēn)等等。

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