3-硝(xiāo)基(jī)酪氨酸(suān)-過氧化物(wù)酶標(biāo)記(jì)物(wù)|3-Nitrotyrosine-Peroxidase Conjugate(3-NT-HRP)

以下是(shì)一(yī)些(xiē)檢測(cè) 3 - 硝基(jī)酪氨酸 - 過(guò)氧化物酶標記(jì)物的方法(fǎ)：

一(yī)，酶聯(lián)免(miǎn)疫吸(xī)附測定（ELISA）

原理(lǐ)：

利用抗體(tǐ)與抗原的特異(yì)性(xìng)結合特性(xìng)。將針對(duì) 3 - 硝基酪(lào)氨酸(suān)的抗體包被在(zài)微(wēi)孔板上(shàng)，加入(rù)含有 3 - 硝基酪(lào)氨酸 - 過氧化物酶標(biāo)記(jì)物的樣(yàng)品後，標記(jì)物(wù)與抗(kàng)體結(jié)合(hé)。

經(jīng)過(guò)洗滌(dí)去(qù)除(chú)未結合(hé)的物質(zhì)，加(jiā)入過氧化物(wù)酶的(dí)底(dǐ)物(wù)，過(guò)氧(yǎng)化(huà)物酶(méi)催(cuī)化(huà)底物反應(yīng)產生有色產物(wù)。

通過(guò)測定(dìng)有色(sè)產物(wù)的(dí)吸光(guāng)度，可(kě)以(yǐ)定(dìng)量分析(xī)樣品中 3 - 硝(xiāo)基(jī)酪(lào)氨酸 - 過氧化(huà)物酶(méi)標(biāo)記(jì)物的含量。

步驟(zhòu)：

包被：將(jiāng)特(tè)異性抗體(tǐ)包(bāo)被在微(wēi)孔板(bǎn)上(shàng)，通(tōng)常在 4℃下(xià)過(guò)夜。

封(fēng)閉(bì)：用(yòng)封閉液封(fēng)閉微孔板上(shàng)未(wèi)結(jié)合抗(kàng)體(tǐ)的位點，以減少(shǎo)非(fēi)特(tè)異(yì)性結(jié)合。

加樣(yàng)：加入待測(cè)樣品(pǐn)和標準品，在適當的(dí)溫度下(xià)孵(fū)育一(yī)段(duàn)時間(jiān)，使(shǐ) 3 - 硝基酪氨酸(suān) - 過氧化物(wù)酶標記(jì)物與抗體結合(hé)。

洗(xǐ)滌：用洗滌(dí)液洗滌(dí)微(wēi)孔(kǒng)板，去除未結合的物質。

加(jiā)底物：加入(rù)過氧化物(wù)酶的底(dǐ)物(wù)，如四甲基聯(lián)苯(běn)胺（TMB），在(zài)適(shì)當(dāng)的溫(wēn)度(dù)下孵(fū)育，使(shǐ)底(dǐ)物發生顯色(sè)反應(yīng)。

終止(zhǐ)反應：加入終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)終止(zhǐ)反(fǎn)應(yīng)，通常(cháng)為硫酸(suān)或(huò)鹽酸。

測(cè)定(dìng)吸(xī)光度(dù)：使(shǐ)用酶標儀測定有色(sè)產物的吸光(guāng)度，根據標(biāo)準曲(qū)綫計算樣品中 3 - 硝(xiāo)基酪(lào)氨酸 - 過(guò)氧(yǎng)化(huà)物酶標(biāo)記(jì)物的含(hán)量(liáng)。

二，免(miǎn)疫(yì)組織化學(xué)法

原理：

利用(yòng)抗(kàng)體與抗原在組(zǔ)織切片上的特異性結合。將組(zǔ)織(zhī)切(qiē)片(piàn)與針對 3 - 硝(xiāo)基酪氨(ān)酸的(dí)抗(kàng)體和過氧(yǎng)化(huà)物酶(méi)標記的(dí)二抗進(jìn)行(háng)孵(fū)育，過氧(yǎng)化物酶催化底物反(fǎn)應產(chǎn)生有(yǒu)色(sè)產(chǎn)物，從(cóng)而(ér)顯(xiǎn)示(shì)組(zǔ)織(zhī)中(zhōng) 3 - 硝(xiāo)基酪(lào)氨酸(suān) - 過(guò)氧化物酶標記(jì)物的分(fēn)布(bù)。

步驟(zhòu)：

組織處理(lǐ)：將(jiāng)組織固(gù)定(dìng)，脫(tuō)水(shuǐ)，包埋(mái)，製成組織(zhī)切(qiē)片。

抗原修復(fù)：根據需要(yào)進行(háng)抗(kàng)原(yuán)修(xiū)復，以提高抗體與抗原的結合能力。

封(fēng)閉：用(yòng)封(fēng)閉液(yè)封閉組織切(qiē)片上的(dí)非特異性(xìng)結合(hé)位(wèi)點(diǎn)。

一抗孵(fū)育(yù)：加(jiā)入(rù)針對 3 - 硝基(jī)酪氨酸(suān)的抗體(tǐ)，在適當(dāng)的溫度下孵育一段時(shí)間(jiān)。

洗(xǐ)滌：用洗(xǐ)滌液洗滌組(zǔ)織切片(piàn)，去除(chú)未結合的(dí)一抗。

二(èr)抗孵育(yù)：加(jiā)入過(guò)氧化物(wù)酶標(biāo)記(jì)的(dí)二抗(kàng)，在適當的(dí)溫度(dù)下孵育一段時間(jiān)。

洗滌：再(zài)次洗(xǐ)滌組織切(qiē)片，去除(chú)未結(jié)合的二抗。

加(jiā)底物：加入過氧(yǎng)化物酶(méi)的(dí)底物(wù)，使底(dǐ)物(wù)發(fā)生顯色(sè)反應。

復(fù)染：根據需要(yào)進行復染(rǎn)，以(yǐ)增(zēng)強(qiáng)組(zǔ)織(zhī)形態的(dí)顯示。

封片(piàn)：用(yòng)封片劑(jì)封片(piàn)，以便觀(guān)察和(hé)保存。

三(sān)，免疫印跡法（Western blotting）

原理(lǐ)：

通過電泳(yǒng)分離(lí)蛋(dàn)白(bái)質，然(rán)後(hòu)將(jiāng)蛋白質轉(zhuǎn)移(yí)到膜上(shàng)，利(lì)用抗體與抗(kàng)原的(dí)特(tè)異性(xìng)結合檢(jiǎn)測目標蛋(dàn)白(bái)質(zhì)。對(duì)於(yú) 3 - 硝基(jī)酪氨(ān)酸 - 過氧化物酶(méi)標記物(wù)，可(kě)以使用(yòng)針對 3 - 硝基酪氨(ān)酸的(dí)抗(kàng)體(tǐ)進(jìn)行(háng)檢測。

步驟：

樣品製(zhì)備(bèi)：將(jiāng)含有 3 - 硝(xiāo)基酪氨(ān)酸 - 過(guò)氧化物(wù)酶(méi)標記(jì)物(wù)的(dí)樣品進行蛋白質(zhì)提取(qǔ)和(hé)定(dìng)量(liáng)。

電泳：進(jìn)行 SDS-PAGE 電泳(yǒng)，將蛋(dàn)白質分離成(chéng)不(bù)同(tóng)的條(tiáo)帶(dài)。

轉膜(mó)：將電泳分離(lí)後(hòu)的(dí)蛋白質(zhì)轉移(yí)到膜(mó)上，如硝(xiāo)酸纖維素膜或 PVDF 膜(mó)。

封(fēng)閉：用封閉(bì)液(yè)封閉(bì)膜上(shàng)的(dí)非(fēi)特異(yì)性結合位點。

一抗(kàng)孵育：加入針對 3 - 硝(xiāo)基酪氨酸(suān)的抗體(tǐ)，在(zài)適(shì)當(dāng)的(dí)溫度下孵(fū)育一段時間。

洗滌：用(yòng)洗滌液洗(xǐ)滌(dí)膜，去(qù)除未結合的一(yī)抗。

二抗孵(fū)育：加(jiā)入(rù)過(guò)氧化(huà)物(wù)酶標記的(dí)二抗(kàng)，在(zài)適當(dāng)的溫度(dù)下(xià)孵(fū)育(yù)一(yī)段(duàn)時間(jiān)。

洗(xǐ)滌(dí)：再次洗滌(dí)膜，去(qù)除未(wèi)結(jié)合的(dí)二抗。

加底(dǐ)物(wù)：加入過氧化(huà)物酶的(dí)底物，使(shǐ)底物(wù)發(fā)生顯色反(fǎn)應(yīng)或化(huà)學發(fā)光反應(yīng)。

檢測：使(shǐ)用(yòng)成像(xiàng)係統或化學(xué)發光(guāng)檢測(cè)儀(yí)檢測膜上的(dí)信號，根據信號強度(dù)確(què)定樣品中 3 - 硝(xiāo)基(jī)酪氨酸(suān) - 過氧(yǎng)化物(wù)酶標記(jì)物(wù)的(dí)含量。

四，高效(xiào)液相色譜(pǔ)法（HPLC）

原理(lǐ)：

利用(yòng)高效(xiào)液(yè)相(xiāng)色譜(pǔ)的分離能(néng)力(lì)，將樣品中(zhōng)的(dí) 3 - 硝基酪(lào)氨酸與(yǔ)其(qí)他(tā)物質分離，然後通(tōng)過檢測(cè)器檢測 3 - 硝基酪(lào)氨酸(suān)的含量(liáng)。對(duì)於 3 - 硝基(jī)酪氨(ān)酸 - 過氧化物酶標(biāo)記(jì)物(wù)，可(kě)以先將過氧(yǎng)化(huà)物酶標(biāo)記部分進行(háng)處(chǔ)理(lǐ)，使(shǐ)其(qí)與 3 - 硝(xiāo)基(jī)酪氨酸分(fēn)離，然後再進行檢測(cè)。

步驟：

樣(yàng)品(pǐn)處(chǔ)理：將(jiāng)含(hán)有(yǒu) 3 - 硝基酪氨(ān)酸 - 過(guò)氧化(huà)物酶標記(jì)物(wù)的樣(yàng)品進行適(shì)當(dāng)的處(chǔ)理(lǐ)，如提取(qǔ)，純(chún)化，酶解等，以(yǐ)去除(chú)幹(gān)擾(rǎo)物質(zhì)並將(jiāng) 3 - 硝(xiāo)基(jī)酪氨(ān)酸從標(biāo)記物(wù)中分(fēn)離出來(lái)。

色譜分(fēn)離：將(jiāng)處(chǔ)理(lǐ)後的樣品注(zhù)入高(gāo)效(xiào)液相色(sè)譜儀，使(shǐ)用合(hé)適的色譜(pǔ)柱(zhù)和流動相進(jìn)行(háng)分(fēn)離。

檢(jiǎn)測(cè)：使用(yòng)紫(zǐ)外(wài)檢測器，熒光(guāng)檢測器或電(diàn)化學檢測(cè)器等(děng)檢(jiǎn)測 3 - 硝基酪(lào)氨酸(suān)的含量(liáng)。

定量分(fēn)析：根據(jù)峰麵(miàn)積或峰(fēng)高(gāo)進(jìn)行定量分(fēn)析(xī)，確定樣(yàng)品中 3 - 硝(xiāo)基酪(lào)氨酸(suān)的濃(nóng)度(dù)。

關於我(wǒ)們(mén):

陝(shǎn)西(xī)星貝愛科生物(wù)科技(jì)經(jīng)營(yíng)的(dí)產品種(zhǒng)類包(bāo)括(kuò)有：合成磷脂(zhī)，高(gāo)分子聚乙二醇衍生物，嵌段共(gòng)聚(jù)物(wù)，磁性納米顆粒，納米金及(jí)納米金(jīn)棒(bàng)，近紅外熒(yíng)光染(rǎn)料，活性(xìng)熒光染料(liào)，熒光(guāng)標記(jì)物(wù)，蛋白交聯劑，小分(fēn)子PEG衍(yǎn)生物，點(diǎn)擊(jī)化學(xué)產(chǎn)品(pǐn)，樹枝狀聚(jù)合(hé)物，環糊精(jīng)衍生(shēng)物，大環配體類(lèi)，熒光量子點，透明質酸衍生物，石(shí)墨烯或氧化石墨(mò)烯(xī)，碳(tàn)納米管，富(fù)勒烯(xī)，二氧化矽及介孔二氧(yǎng)化(huà)矽，聚合物微(wēi)球，近紅外熒(yíng)光染料(liào)，聚(jù)苯乙烯微球，上(shàng)轉(zhuǎn)換(huàn)納米(mǐ)發光顆粒，MRI核磁(cí)造(zào)影產品，熒(yíng)光蛋白(bái)及熒(yíng)光(guāng)探(tàn)針(zhēn)等等(děng)。

溫馨(xīn)提示(shì)：供應產品僅(jǐn)用於科(kē)研(yán)，不(bù)能用(yòng)於人(rén)體！

相(xiāng)關(guān)產品：

酪氨(ān)酸-疊氮(dàn)，L-Tyrosine-N3

色氨酸-疊(dié)氮(dàn),L-Tryptophan-N3

PTX-NHS,紫杉(shān)醇(chún)修(xiū)飾(shì)活化(huà)酯

喜(xǐ)樹鹼-花(huā)生四(sì)烯酸，Camptothecin-Arachidonic acid

DBCO-Hemin

卡(qiǎ)巴他(tā)賽(sài)-疊(dié)氮，Cabazitaxel-N3

硬脂(zhī)酸(suān)-BSA，Stearic acid-BSA

透(tòu)明(míng)質酸-阿倫(lún)磷酸鈉，HA-Alendronate sodium

DOTA-昆(kūn)布多(duō)糖