一(yī)，基(jī)本信(xìn)息

JC-1，全稱(chēng)5,5′,6,6′-四(sì)氯-1,1′,3,3′-四乙基(jī)苯(běn)並咪唑羰花青(qīng)碘(diǎn)化物，英(yīng)文(wén)名(míng)為5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide，別(bié)名CBIC2(3)。CAS號(hào)3520-43-2，分子(zǐ)式C₂₅H₂₇Cl₄IN₄，分子量(liáng)652.23。外觀為紅(hóng)褐色至(zhì)紅棕色(sè)固體粉(fěn)末，純度(dù)通(tōng)常≥95%（HPLC驗(yàn)證）。易(yì)溶於(yú)DMSO（濃度可(kě)達(dá)10 mg/mL），不溶(róng)於(yú)水。存儲條件(jiàn)為(wéi)-20°C以下，避光，幹燥，密(mì)封(fēng)保(bǎo)存(cún)，建(jiàn)議充惰性氣體(tǐ)（氮氣(qì)或氬氣）保(bǎo)護(hù)，避(bì)免反復凍融。

二(èr)，主要(yào)應用(yòng)

細胞凋(diāo)亡(wáng)研究： 這(zhè)是JC-1最(zuì)核(hé)心(xīn)的應(yīng)用。通過(guò)紅(hóng)綠(lǜ)比(bǐ)值(zhí)的變(biàn)化，可以在凋亡發(fā)生的最早(zǎo)期（綫(xiàn)粒體(tǐ)膜電(diàn)位下降階(jiē)段）即檢測到信號，比Annexin V/PI雙(shuāng)染法早數(shù)小(xiǎo)時，比TUNEL法(fǎ)更(gēng)早(zǎo)。廣(guǎng)泛用於(yú)藥物誘導(dǎo)凋亡，輻射(shè)損(sǔn)傷，氧化應激等(děng)模(mó)型中。

綫(xiàn)粒體功能(néng)研究(jiū)： 監測(cè)綫粒(lì)體膜(mó)電位(wèi)在不(bù)同(tóng)生理或(huò)病(bìng)理條(tiáo)件下的(dí)動態(tài)變化，如缺氧/復(fù)氧，鈣超載，代謝(xiè)應激(jī)等(děng)。

藥(yào)物篩選(xuǎn)與評(píng)價： 評估候(hòu)選藥物對綫(xiàn)粒體(tǐ)功能(néng)的(dí)影(yǐng)響，判斷藥(yào)物(wù)是否(fǒu)具有(yǒu)綫粒體毒性(xìng)，是(shì)藥物安(ān)全(quán)性(xìng)評(píng)價(jià)的常規(guī)手段(duàn)之一(yī)。

神經(jīng)退(tuì)行性疾病研(yán)究： 在(zài)阿爾茨海默(mò)病，帕(pà)金森病，ALS等(děng)疾病模型(xíng)中，綫(xiàn)粒體功能(néng)障礙(ài)是(shì)核(hé)心病理特征(zhēng)之(zhī)一，JC-1可用(yòng)於(yú)評(píng)估(gū)綫粒體(tǐ)損傷程(chéng)度(dù)。

幹細胞研究： 監測(cè)幹細胞分化過程(chéng)中綫粒體膜電位的動(dòng)態(tài)變化，評(píng)估幹(gān)細(xì)胞(bāo)的(dí)質量和分(fēn)化狀態。

三，存儲(chǔ)與實驗(yàn)注意事(shì)項

存(cún)儲(chǔ)條件： -20°C以(yǐ)下，避光，幹燥，密封(fēng)保(bǎo)存，建議充惰性(xìng)氣體保(bǎo)護(hù)。

溶(róng)解方式(shì)： 用無水DMSO配製(zhì)成儲存(cún)液（通(tōng)常5-10 mM），-20°C避(bì)光(guāng)保存。使用前(qián)用生理(lǐ)緩(huǎn)衝液(yè)（如(rú)PBS，HBSS或無(wú)血清培(péi)養基）稀釋至工(gōng)作濃(nóng)度(dù)（通常2-10 μM）。

工(gōng)作濃度(dù)： 一般為2-10 μM，具(jù)體(tǐ)需(xū)根(gēn)據細胞類(lèi)型(xíng)和實(shí)驗目的預實驗優化(huà)。濃(nóng)度過高(gāo)（>20 μM）可(kě)能產(chǎn)生非特異性染色(sè)或(huò)毒(dú)性；濃度(dù)過(guò)低(dī)（<1 μM）信號太弱。

DMSO終(zhōng)濃度： 反(fǎn)應體係中(zhōng)DMSO濃度不應超(chāo)過(guò)0.1%-0.2%（即終濃(nóng)度(dù)≤2 μL/mL），否則(zé)可能影響(xiǎng)細(xì)胞活(huó)性。

染(rǎn)色(sè)時(shí)間(jiān)： 一般30-45分(fēn)鐘，37°C孵育。染色時間過長可能(néng)導(dǎo)致(zhì)探(tàn)針重(zhòng)新分(fēn)布(bù)，影(yǐng)響比值(zhí)準(zhǔn)確性。

洗(xǐ)滌步驟： 染(rǎn)色(sè)後(hòu)需用預(yù)熱的PBS或緩(huǎn)衝液洗滌(dí)2-3次(cì)，去(qù)除未結合的JC-1單(dān)體，降低背(bèi)景(jǐng)綠(lǜ)色(sè)熒光。

避免(miǎn)光(guāng)漂(piāo)白： 全程避光操(cāo)作，染(rǎn)色後(hòu)盡快檢測，不要(yào)長(cháng)時間暴露(lòu)在(zài)激發(fā)光(guāng)下。

緩(huǎn)衝液(yè)選(xuǎn)擇(zé)： 避免使(shǐ)用含(hán)伯胺(àn)的緩衝(chōng)液（如(rú)Tris，甘氨酸），它(tā)們(mén)會與JC-1競爭(zhēng)反應。推薦(jiàn)使(shǐ)用(yòng)PBS，HBSS或(huò)HEPES緩(huǎn)衝(chōng)液（pH 7.2-7.4）。

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3,3'-二乙基硫二碳花菁碘(diǎn)化(huà)物(wù)

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3,3'-二(èr)-n-戊(wù)基(jī)惡唑二(èr)羰花青碘(diǎn)化(huà)物

3,3′-二乙(yǐ)基(jī)氧雜羰花(huā)青碘(diǎn)