JC-1(綫(xiàn)粒體膜(mó)電位(wèi)探(tàn)針)的(dí)描(miáo)述
2024-05-26
[2775]
檢(jiǎn)測原(yuán)理
JC-1的(dí)工作(zuò)原(yuán)理基於其在不(bù)同綫粒體(tǐ)膜電位(wèi)狀(zhuàng)態下的熒光(guāng)特性(xìng)變(biàn)化。在高綫粒(lì)體膜(mó)電位(wèi)的情況(kuàng)下,JC-1以聚(jù)合(hé)物的形式(shì)存在,發出(chū)紅(hóng)色熒光(guāng);而在(zài)低(dī)綫(xiàn)粒(lì)體(tǐ)膜(mó)電(diàn)位的(dí)情(qíng)況下,JC-1以單(dān)體的形式(shì)存在,發出(chū)綠色(sè)熒光(guāng)。通(tōng)過監(jiān)測(cè)紅綠(lǜ)熒(yíng)光(guāng)的(dí)比(bǐ)例變化(huà),可以評(píng)估(gū)綫(xiàn)粒體的狀態(tài),從而(ér)判斷細(xì)胞的(dí)健康(kāng)程(chéng)度或是(shì)否處於凋(diāo)亡過程中(zhōng)。
結構(gòu)式(shì):

概述(shù)
JC-1是一種常用的熒(yíng)光探針(zhēn),用於(yú)測量(liáng)綫粒體(tǐ)膜電位。它能(néng)夠(gòu)選擇性地進入(rù)綫(xiàn)粒體,並且(qiě)隨著(zhuó)綫粒體膜(mó)電位的(dí)增加(jiā),可以(yǐ)逆地(dì)將(jiāng)其顏色從綠色(sè)變為橙色。這種(zhǒng)性質使得JC-1成為(wéi)研(yán)究細胞凋(diāo)亡(wáng)時的理想(xiǎng)工(gōng)具,因為綫粒(lì)體膜電位(wèi)的(dí)下(xià)降是細胞凋(diāo)亡早期(qī)的(dí)一(yī)個標誌(zhì)性事件。
染色(sè)步驟
使(shǐ)用(yòng)JC-1進(jìn)行綫(xiàn)粒(lì)體(tǐ)膜電位檢(jiǎn)測的步驟通常包(bāo)括細(xì)胞準(zhǔn)備(bèi), JC-1染(rǎn)色(sè),洗滌(dí)和熒(yíng)光檢(jiǎn)測等幾個(gè)環節。具體的步驟可能會(huì)根據實(shí)驗條件和(hé)設備的不同而有(yǒu)所差異,但(dàn)基(jī)本流程(chéng)通(tōng)常(cháng)是(shì):
細(xì)胞準備:將細(xì)胞(bāo)鋪(pū)板在(zài)多孔培養(yǎng)板(bǎn)上,然(rán)後在適(shì)宜(yí)的(dí)條件下(xià)培養(yǎng)過夜(yè)。
JC-1染色(sè):取(qǔ)一定體(tǐ)積(jī)的細胞(bāo)懸(xuán)液,加(jiā)入(rù) JC-1工作液(yè),在適宜的溫(wēn)度(dù)和(hé)二氧(yǎng)化(huà)碳環(huán)境(jìng)下(xià)孵育一段時間(jiān)。
洗滌:離(lí)心細胞懸液,去除上清,然後(hòu)用(yòng)緩(huǎn)衝液洗(xǐ)滌以去(qù)除未(wèi)結(jié)合(hé)的染料。
熒(yíng)光檢(jiǎn)測:用熒光顯微鏡或流式(shì)細胞儀分析經JC-1染色後的(dí)細胞(bāo),通過(guò)觀察紅綠熒光的比(bǐ)例(lì)變化(huà)來(lái)判斷綫(xiàn)粒體膜(mó)電(diàn)位的狀態(tài)。
注意事項(xiàng)
JC-1必(bì)須在超(chāo)純水(shuǐ)充(chōng)分(fēn)溶(róng)解混(hùn)匀後才能加(jiā)入到(dào)JC-1染色緩衝液中(zhōng),否則(zé)會(huì)影響(xiǎng)後續的檢測。
PH的(dí)變化會(huì)影響(xiǎng)膜(mó)電位(wèi),因此在(zài)染色(sè)過程(chéng)中(zhōng)需(xū)要(yào)保持(chí)染液(yè)中pH的(dí)一(yī)致(zhì)性。
JC-1不(bù)易(yì)溶(róng)於水(shuǐ)並有大量(liáng)沉澱產(chǎn)生,因此在(zài)操(cāo)作時需要(yào)特(tè)別(bié)注意。
關(guān)於我(wǒ)們(mén):
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溫馨提示:供(gōng)應產(chǎn)品(pǐn)僅用(yòng)於科研,不(bù)能用(yòng)於(yú)人(rén)體(tǐ)!
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